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《化學交聯(lián)aβ的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、碩士學位論文化學交聯(lián)Ap的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究TheResearchoftheNeurotoxicityandtheInteractionwithInsulinReceptorofChemicalCross-linkedAmyloid一13學21118073完成日期：2014．5．8大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學學位論文獨創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地
2、方外，本論文不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請學位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實之處，本人愿意承擔相關法律責任。學位論文題目：作者簽名：大連理工大學碩士學位論文摘要淀粉樣蛋白p(,知-ny’]oidp，Ap)是阿爾茨海默癥的重要特征分子之一，同時也被認為是該病的主要風險因子。AB單體能夠進行自我聚集形成分子量各異的多種聚集體，并通過多種方式損傷神經(jīng)系統(tǒng)，其中寡聚體AD與重要信號通路的受體相互作用被認為是其發(fā)揮神
3、經(jīng)毒性的核心方式?；瘜W交聯(lián)方法是A13研究中用于制備寡聚體A13的主要手段，但化學交聯(lián)過程是否對Ap聚集體的性質和神經(jīng)毒性產(chǎn)生影響尚未得到明確的闡釋：。本論文以傳統(tǒng)的非交聯(lián)方法制備的AB寡聚體為對照，對非修飾蛋白的光催化交聯(lián)法(photo．inducedCROSS．1inkingofunmodifiedproteins，PICUP)和Cu2+氧化交聯(lián)法制備的Ap聚集體的性質和神經(jīng)毒性進行了研究；另外，已有研究報道不同的AD寡聚體具有不同的神經(jīng)毒性，而對于不同的AB寡聚體是否通過不同的途徑產(chǎn)生不同的病理作用還沒有
4、明確的報道，本論文以神經(jīng)元胰島素受體(insulinreceptor，IR)為研究對象，研究了PICUP法制備的不同的寡聚體對胰島素受體分布的影響。研究結果如下1)，通過控制PICUP和Cu2+氧化交聯(lián)的反應條件，獲得了兩種不同方法制備的一定分子量范圍的A6聚集體，并通過透析方法除去了溶液中的交聯(lián)劑。通過tricine．SDS．PAGE檢測發(fā)現(xiàn)，不同制備方法獲得的Ap中，Ap單體所占總體比例存在明顯差異，不同分子量大小的Ap寡聚體所占比例略有不同，其中PICUP法制備Ap聚集體的效率最高，非交聯(lián)法獲得AB聚集體
5、的量最低；Zeta電位檢測發(fā)現(xiàn)，三種A13溶液的Zeta電位均處于．10～15mV區(qū)間，屬于具有進一步聚集趨勢的非穩(wěn)定狀態(tài)。硫磺素T檢測表明，Cu2+氧化交聯(lián)Ap具有遠低于非交聯(lián)Ap和PICUP．Ap的p．片層結構密度，顯示其可能具有不同于其他兩者的神經(jīng)毒性。2)本論文使用上述3種AB對新生SD大鼠海馬神經(jīng)元進行了濃度梯度處理，通過MTT檢測、流式細胞術以及Western印跡法對神經(jīng)元存活率、不同時期凋亡率以及關鍵凋亡蛋白的活化程度的檢測，比較了不同方法制備的Ap的神經(jīng)毒性。結果表明在三種Ap中，Cu2+氧化交
6、聯(lián)Ap降低神經(jīng)元存活率的能力最強，能夠最高程度地誘導神經(jīng)元進入早期／中晚期凋亡，引起了凋亡蛋白Caspase3活化程度的顯著上調(diào)，并且導致細胞漿中細胞色素C含量升高。然而，在Cu2+氧化交聯(lián)AB引起Caspase9活化的過程中，可能存在對Caspase9上游信號的調(diào)控而最終體現(xiàn)為和另外兩種Ap相似的Caspase9活性。此外，三種Ap都具有引起T-NOS和CAT酶活上調(diào)的能力，其中Cu2+／I-1202交聯(lián)Ap較強的CAT活力上調(diào)功能表明該交聯(lián)AD具有更復雜的毒性機理。3)利用電洗脫回收和有機溶劑沉淀法，成功分
7、離和富集了2-4聚體A13，分別使用不同寡聚態(tài)的AB進行了神經(jīng)元處理，并觀測了神經(jīng)元IR受到的影響。細胞免疫熒光試化學交聯(lián)AB的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究驗結果表明：二聚體AB主要具有誘導IR重新分布的作用，而三聚體和四聚體更傾向于競爭性結合IR并引起IR密度降低。關鍵詞：淀粉樣蛋白D；化學交聯(lián)；神經(jīng)毒性；胰島素受體大連理工大學碩士學位論文TheResearchoftheNeurotoxicityandtheInteractionwithInsulinReceptorofChemicalCross·li
8、nkedAmyloid—pAbstractAmyloid·p(Ap)isahallmarkofAlzheimer‘Sdisease(AD)，andisconsideredasamajorriskfactorofAD．ADmonomerformsaggregatesofdiversemolecularweightbyself-assembly．TheA13aggregatesimpair
