sirna抑制znf139對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤細(xì)胞凋亡影響及機(jī)制研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。。。。．。?每氛研究生答名‘彩節(jié)別幣答立：慈個(gè)船學(xué)篙冀氯3肋日。：l河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研

2、究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：培書導(dǎo)師簽章：苊生今＼加心年多月工∥日目錄中文摘要??????????????????????????“1英文摘要??????????????????????????”5英文縮寫??????????????????????????”11研究論文siRNA抑制ZNFl39對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤細(xì)胞凋亡影響及機(jī)制研究前言O(shè)OOOO??·?????···?···OOOOO????··???·???·?··1。2刖舌””””?”““”“”””””“““””””””””””“”””””。=z材料與方法?????????

3、??????????????·12結(jié)果????????????????????·?·?????22附圖····??······················?············?·“””””···········“”””26附表??????????????????????????··32討論?······························································?············34結(jié)論······?·················?·················?········”·············

4、········39參考文獻(xiàn)????????????????????????·40綜述鼬蛆干擾對(duì)胃癌凋亡相關(guān)基因的研究??????????·43致謝···························································?············?·········57個(gè)人簡(jiǎn)歷??????????????????????????”58中文摘要siRNA抑制ZNFl38對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤細(xì)胞凋亡影響及機(jī)制研究摘要目的：胃癌是一種常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的健康。近年大量研究表明，鋅指蛋白Kriippel家族中的許多成員可以通過調(diào)控凋

5、亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，來介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)。ZNFl39就屬于Klmppel家族成員。本課題組前期研究表明：ZNFl39在大多數(shù)胃癌中高表達(dá)，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而ZNFl39基因的表達(dá)與胃癌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl一2的表達(dá)是否有關(guān)尚無報(bào)道，有待于通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)利用重組質(zhì)粒siRNA-ZNFl39沉默人胃癌細(xì)胞SGC．7901裸鼠原位移植瘤中ZNFl39基因的表達(dá)，以觀察研究其對(duì)人胃癌裸鼠原位移植瘤細(xì)胞凋亡水平的影響，探討ZNFl39與胃癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系及機(jī)制。方法：1重組質(zhì)粒siRNA．ZNFl39及陰性對(duì)照質(zhì)粒contr01．siRNA由天根

6、生化科技有限公司設(shè)計(jì)合成，應(yīng)用無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒提取重組質(zhì)粒。抽提完畢后，所提取的質(zhì)粒經(jīng)紫外分光光度儀檢測(cè)濃度和純度。利用RT-PCR方法檢測(cè)重組質(zhì)粒siRNA．ZNFl39的沉默效率。2以人胃癌細(xì)胞株SGC．7901反復(fù)接種傳代于BALB／C一(nu／nu)裸小鼠皮下形成的皮下移植瘤組織塊為材料，將傳代6次的組織塊接種在裸小鼠胃壁漿膜層下，觀察裸鼠的生存狀態(tài)及移植瘤的生長(zhǎng)情況。建立人胃癌細(xì)胞株SGC．7901裸鼠原位移植瘤動(dòng)物模型。3待腫瘤直徑約5ram時(shí)，將其隨機(jī)分為3組，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組5只。1天、3天、5天、7天、9天，利用微量注射器分別將生理鹽水50

7、pl，contr01．siRNA20tig，重組質(zhì)粒siRNA-ZNF13920ug注射入對(duì)應(yīng)組的裸鼠原位移植瘤內(nèi)。每天觀察原位移植瘤的生長(zhǎng)情況。4在每次對(duì)瘤內(nèi)進(jìn)行注射前和處死裸鼠剝?nèi)≡灰浦擦龊鬁y(cè)量移植瘤的最長(zhǎng)徑(A)及最短徑(B)，根據(jù)公式：腫瘤體積(mm3)=1／2×A×中文摘要B2，計(jì)算腫瘤的近似體積，并制作腫瘤的生長(zhǎng)曲線。5對(duì)裸鼠干預(yù)5次后，于第11天頸椎脫臼處死全部裸鼠，完整剝離瘤體，稱取瘤重，以計(jì)算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對(duì)照組瘤重一實(shí)驗(yàn)組