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1、分類(lèi)號(hào)：R735.2密級(jí)：公開(kāi)學(xué)校代碼：11065學(xué)號(hào)：y0113130032專(zhuān)業(yè)博士學(xué)位論文TMEM41A在胃癌中表達(dá)的臨床意義及其在胃癌轉(zhuǎn)移中的機(jī)制探討作者姓名林彬指導(dǎo)教師毛偉征（教授）專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域外科學(xué)（普外科）培養(yǎng)單位醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)系答辯日期2018年5月19日TMEM41A在胃癌中表達(dá)的臨床意義及其在胃癌轉(zhuǎn)移中的機(jī)制探討摘要目的：跨膜（Transmembrane,TMEM）蛋白家族存在于真核細(xì)胞膜上，參與信號(hào)傳導(dǎo)途徑和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。這些蛋白質(zhì)在膀胱癌、卵巢癌和結(jié)直腸癌中起關(guān)鍵作用。TMEM家族具有300多個(gè)蛋白，這些蛋白既在細(xì)胞的生理功能過(guò)程發(fā)生作用，如
2、構(gòu)成細(xì)胞膜的離子通道、活化信號(hào)傳導(dǎo)通路、影響細(xì)胞趨化、粘附、調(diào)亡等，也在病理過(guò)程中參與細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、免疫相關(guān)疾病等。TMEM41A是TMEM家族的成員之一，是由人類(lèi)3號(hào)染色體上基因編碼的264個(gè)氨基酸蛋白。人3號(hào)染色體存在近21萬(wàn)堿基對(duì)，編碼1000多個(gè)基因。人3號(hào)染色體上存在一系列的癌癥相關(guān)位點(diǎn)，并且編碼一系列趨化因子基因簇。其一些特殊位點(diǎn)在一些腫瘤細(xì)胞中缺失。胃癌在全球范圍內(nèi)，特別是我國(guó)，是發(fā)病率最高、最常見(jiàn)的消化系統(tǒng)來(lái)源的惡性腫瘤之一。轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是惡性腫瘤患者死亡的最主要原因之一。腫瘤轉(zhuǎn)移是指原發(fā)部位的惡性腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤的生
3、長(zhǎng)部位通過(guò)血液、淋巴等不同的轉(zhuǎn)移方式，到達(dá)機(jī)體內(nèi)的相同或不同繼發(fā)組織或器官，在這些部位得以繼續(xù)生長(zhǎng)，形成與原發(fā)腫瘤相同生物學(xué)特性的繼發(fā)腫瘤的全過(guò)程。這整個(gè)過(guò)程包括多個(gè)階段、過(guò)程，其中腫瘤細(xì)胞具有侵襲特性是腫瘤轉(zhuǎn)移的前提，侵襲能力越強(qiáng)，轉(zhuǎn)移的特性越強(qiáng)。但是TMEM41A在胃癌中的確切作用至今尚未確定。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討TMEM41A在胃癌中表達(dá)的臨床意義,以及其在胃癌轉(zhuǎn)移中的機(jī)制。方法：1.TMEM41A在胃癌組織中的表達(dá)和胃癌根治性切除患者預(yù)后的相關(guān)性分析應(yīng)用Real-TimePCR和免疫組織化學(xué)的方法對(duì)病人的臨床病理組織進(jìn)行分析，手術(shù)標(biāo)本來(lái)源于患者手術(shù)中切除的
4、臨床病理組織標(biāo)本，術(shù)前經(jīng)胃鏡病理診斷為胃癌，術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)診斷為胃癌，位置包括胃底、胃體、胃竇及賁門(mén)、幽門(mén)等位置。所有患者的臨床病理學(xué)資料完整，包括年齡、性別、分化程度、腫瘤位置、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期等。納入研究中的胃癌患者施行腫瘤切除手術(shù)前均未曾接受放、化療等抗腫瘤臨床治療。通過(guò)醫(yī)院病理科收集上述患者組織蠟塊，排除臨床及病歷資料不完整及失訪病例，將納入臨床分析的實(shí)際病例的組織切片進(jìn)行固定染色，確定組織學(xué)分級(jí)及病理學(xué)類(lèi)型等，評(píng)估TMEM41A在胃癌中的表達(dá)和定位及其與預(yù)后的關(guān)系。首先采用qRT-PCR法檢測(cè)胃癌組織和癌旁正常組織的TME
5、M41A的mRNA表達(dá)水平。我們將病人的胃癌組織根據(jù)的病理結(jié)果有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組，分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，將兩組的mRNA水平I進(jìn)行對(duì)比分析，檢測(cè)TMEM41AmRNA表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。我們又將病人的胃癌組織根據(jù)手術(shù)時(shí)的病理結(jié)果按有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組，分為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移陰性組，將兩組的mRNA水平進(jìn)行對(duì)比分析，檢測(cè)TMEM41AmRNA表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系。除此之外，我們又將病人的胃癌組織根據(jù)手術(shù)時(shí)的TNM分期進(jìn)行分組，分為T(mén)NMI、II、III、IV期。將4組的TMEM41AmRNA水平進(jìn)行對(duì)比分析，檢測(cè)TMEM41A
6、mRNA表達(dá)水平與TNM分期的關(guān)系。我們利用免疫組織化學(xué)染色，對(duì)患者的胃癌及癌旁組織標(biāo)本中TMEM41A進(jìn)行定位，根據(jù)表達(dá)強(qiáng)度將標(biāo)本分為表達(dá)陽(yáng)性組和表達(dá)陰性組。為了研究TMEM41A的表達(dá)和胃癌的臨床病理特征的關(guān)系，我們將所有臨床病理學(xué)資料完整的病人，按年齡、性別、分化程度、腫瘤位置、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期等根據(jù)其表達(dá)高低進(jìn)行分組，分析比較TMEM41A在各組間的表達(dá)差異,研究TMEM41A的表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性。將患者按照TEME41A的高低表達(dá)分組，分別統(tǒng)計(jì)隨訪時(shí)間內(nèi)的死亡率以及無(wú)病生存率，分析比較TEME41A的高低表達(dá)與死亡率和無(wú)病
7、生存率的關(guān)系。分別統(tǒng)計(jì)隨訪時(shí)間內(nèi)1年生存率，3年生存率及5年生存率，分析比較TEME41A的高低表達(dá)與它們的關(guān)系，并以此為依據(jù)繪制生存曲線2.TMEM41A表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響我們檢測(cè)了TMEM41A在不同胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。TMEM41A過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)選用目標(biāo)基因表達(dá)量較低的細(xì)胞系，TMEM41A干擾敲低實(shí)驗(yàn)選用目標(biāo)基因表達(dá)量最高的細(xì)胞系。在目標(biāo)基因表達(dá)量高的細(xì)胞系中，通過(guò)WesternBlot檢測(cè)，驗(yàn)證通過(guò)轉(zhuǎn)染si-TMEM41A，是否可以下調(diào)TMEM41A蛋白表達(dá)量；在目標(biāo)基因表達(dá)量低的細(xì)胞中，驗(yàn)證通過(guò)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pCMV6-TMEM41A，是否
8、可以使TMEM41A表達(dá)
