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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M150208367上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：副溶血性弧菌和霍亂弧菌混合生物被膜的形成FormationofmixedbiofilmsofVibrio英文題目：parahaemolyticusandVibriocholerae專業(yè)：食品科學(xué)與工程研究方向：食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及品質(zhì)控制姓名：董旭日指導(dǎo)教師：趙勇教授二O一八年四月二日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，
2、本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者
3、簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱備注主席委員委員委員委員委員委員秘書(shū)答辯地點(diǎn)答辯日期副溶血性弧菌和霍亂弧菌混合生物被膜的形成摘要：細(xì)菌生物被膜（BacterialBiofilm）是許多細(xì)菌粘附在生物或非生物表面后，分泌胞外多糖（EPS）、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA等復(fù)合物，并將細(xì)菌包裹其中而形成的膜狀物，是細(xì)菌為了適應(yīng)自然環(huán)境、利于自身生存的一種存在形態(tài)。自然界中的細(xì)菌大多能形成生物被膜，形成的生物被膜以混合生物被膜狀態(tài)存在。副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyt
4、icus，VP）和霍亂弧菌（Vibriocholera，VC）是海產(chǎn)品中的重要食源性致病菌，。副溶血性弧菌和霍亂弧菌常常在水產(chǎn)品中共存，并能在水產(chǎn)品表面形成混合生物被膜，容易引起食品交叉污染，導(dǎo)致食品腐敗或疾病傳播的隱患，給食品安全帶來(lái)極大威脅。因此研究副溶血性弧菌和霍亂弧菌形成的混合生物被膜，對(duì)食品中的有害生物被膜的控制具有重大意義。本研究以VC菌和VP菌為研究對(duì)象，首先，研究單培養(yǎng)VC菌、VP菌和混合菌生物被膜的形成過(guò)程，分別在4、8、12、24、36、48、60、72h測(cè)量生物被膜的形成；其次，研o究了不同溫度（4、15、25、37
5、C）和不同鹽度(1、2、3、4、5、6、7%)條件下單培養(yǎng)VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成；最后通過(guò)熒光定量PCR、熒光原位雜交研究電解水處理對(duì)單培養(yǎng)VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成的影響，為有效控制VC菌、VP菌形成的混合生物被膜提供基礎(chǔ)。1.副溶血性弧菌-霍亂弧菌混合生物被膜形成過(guò)程的研究在4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、72h測(cè)定單獨(dú)條件下VP、VC及其混合后生物被膜的形成情況，通過(guò)結(jié)晶紫染色法、平板菌落計(jì)數(shù)法、測(cè)定胞外多糖、胞外蛋白，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察單培養(yǎng)及混合條件下生物被膜的形成。
6、雖然形成的混合生物被膜量介于VC和VP之間，但混合生物被膜在形成過(guò)程中，成熟期后生物被膜量的變化較小，對(duì)環(huán)境的抗性增強(qiáng)。混合生物被膜中擁有更多的活菌，混合生物被膜形成過(guò)程中胞外蛋白和胞外多糖的變化體現(xiàn)出其可能在對(duì)抵御逐漸不適應(yīng)環(huán)境中起重要作用。VC與VP共同形成生物被膜的過(guò)程中，混合生物被膜總量雖然減少，但混合生物被膜中擁有更多的活菌，這可能引起更大的危害?；旌仙锉荒せ旌仙锉荒ば纬蛇^(guò)程中被膜的變化，可為有害生物被膜的控制提供基礎(chǔ)。2.環(huán)境因素對(duì)副溶血性弧菌和霍亂弧菌生物被膜形成的影響o通過(guò)研究不同溫度（4、15、25、37C）和不同鹽
7、度(1、2、3、4、5、6、7%)條件下單o培養(yǎng)VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成。結(jié)果表明，混合生物被膜在37C條件下生物被膜的形成能力和生物被膜中的活菌數(shù)比單培養(yǎng)的VC菌和VP菌更多。在5%的鹽度條件下混合菌形成的生物被膜同單培養(yǎng)的VC菌和VP菌相比，表現(xiàn)出了對(duì)高鹽度的較強(qiáng)的抗1性?；旌仙锉荒げ粌H生物被膜量更多，而且擁有更多的活菌。3.副溶血性弧菌-霍亂弧菌混合生物被膜的清除通過(guò)熒光定量PCR和熒光原位雜交（FISH）技術(shù)，研究電解水處理對(duì)單培養(yǎng)VC菌、VP菌及混合菌形成的生物被膜的影響。結(jié)果表明，同單培養(yǎng)的生物被膜相比，混合生物
8、被膜對(duì)電解水的處理表現(xiàn)出了較強(qiáng)的抵抗力。熒光定量PCR的結(jié)果表明了混合生物被膜同單培養(yǎng)的生物被膜相比，在經(jīng)過(guò)電解水處理后，混合生物被膜中細(xì)菌總量減少較少，未像單培養(yǎng)的VC菌和VP菌那樣表現(xiàn)出顯
