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《探析低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵工藝研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、天津大學碩士學位論文低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵工藝研究姓名：唐琦勇申請學位級別：碩士專業(yè)：化學工程指導教師：史清洪;陳藍天20090501摘要新疆地處我國大西北，存在著很多的低溫環(huán)境(冰川和高山)，為尋找低溫微生物供了理想的采樣區(qū)域。低溫微生物所產(chǎn)的酶大多是低溫酶。低溫酶能在低澄下有效發(fā)揮催化作用的特點，使其在生物工程領(lǐng)域有蓿廣泛的應用前景。因此，對低溫微生物的研究無論在理論上還是實踐上都有重要意義。本研究從來自新疆伊犁和阿勒泰地區(qū)的75份土樣中分離出產(chǎn)低溫脂肪酶的低溫菌6株．經(jīng)初篩和搖瓶復篩確定一株產(chǎn)低溫脂肪酶活力較高的蔬株N6-12作為進一步研究的出發(fā)菌株
2、。菌株N6-12在完全培養(yǎng)基上20℃培養(yǎng)72h后，菌落白色、圓形、隆起、不透明、表面光滑、濕潤、邊緣波狀。菌體革蘭氏陰性、桿狀、能運動。常規(guī)生理生化測試表明，葭株N6-12兼性厭氧，最適生長溫度25℃，40℃以上不生長，氧化酶反應陽性，接觸酶反應陽性，不產(chǎn)H2S，明膠液化陽性，水解淀粉陰性，反硝化作用陽性，脂酶陽性，能利用葡萄糖、果糖。經(jīng)過16SrDNA鑒定，與假單胞菌有97．6％的相似度。結(jié)合形態(tài)學、生理生化特征和16SrDNA序列分析結(jié)果，初步認定菌株N6-12屬．丁．假單胞菌屬，暫命名為Pseudomonassp．N6-12。對菌株N6-12產(chǎn)的脂肪酶的酶
3、學性質(zhì)進行了初步研究，結(jié)果表明該低溫脂肪酶的最適催化湓度為30℃，30℃’F處理120rain，酶活性仍有70％。該酶催化的最適pH6．5，在不同pHF的穩(wěn)定性試驗顯示，該酶在pH5．5--．8內(nèi)均較穩(wěn)定。金屬離子中，Cu2+、Fe升對酶有較大的抑制作用，Na+則對酶有激活作用。在搖瓶發(fā)酵水平上，對假單胞菌N6-12的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進行了研究，確定了其最佳培養(yǎng)基成分及最佳培養(yǎng)條件。研究了不同碳源、氨源、無機鹽、產(chǎn)物、底物等岡素對假單胞蘸N6-12產(chǎn)酶的影響，發(fā)現(xiàn)玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量對產(chǎn)酶的影響較大。對玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量四因素各選取三個水平進行
4、正交試驗，確定假單胞菌N6-12產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)基成分為玉米漿2％，豆粕粉3％、葡萄塘l％，裝填量為50ml／250nd。通過搖瓶發(fā)酵試驗，確定其最佳培養(yǎng)條件為：25℃，180r／rain，培養(yǎng)45h。在此條件下培養(yǎng)，低溫脂肪酶酶活力達7．87U／mL，比優(yōu)化前提高了76．8％。關(guān)鍵詞：低溫脂肪酶：篩選：菌株鑒定：假單胞菌；酶學性質(zhì)；產(chǎn)酶優(yōu)化AbstractAsoneofidealsamplingareaforcold-adaptedmicroorganisms，therearevariouslow-temtx'ratureenvironmentsinSmkian
5、g．wherewereadoptedforexistenceoflow-temperatureenzyme-producingmicroorganisms．Lowtemperatureellzyxllespe-rformbetterthananyothernormaltemperatureenzyll鹼sunderlowtemperature，therebyexhibitingagreatpotentialinbioengineering．Inthisthesis，aswamoflow-temperaturemicroorganismW8$collectedan
6、dcharacterizecLTheactivityoftipaseandfermentationconditionwereoptimizedforfln-therresearchSixlow-temperatureghainsusedinthisresearchworecollectedfrom75soilsamplesintwoSinkiang’dislriclsofHiandAletai．Aftertheprimaryscreenmgalow-temperaturelipaseproducingstrain(namedasN6-12)obtainedwas
7、usedinfollowingresearches．Afterculturedunder20℃for72h,thecolonyofthestrainN6-12onTYEGculturemediumwaswhile，round,uplifted．opaque，smoothandmoist．Thestrainwasgramnegative，rodshapeandlocomotion．TheresultsofbiochemistryandphysiologytestshowedthatthebesttemperatureforitsgrowthWas25"Candth
8、egrowthWasin
