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《探析低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵工藝研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵工藝研究姓名:唐琦勇申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):化學(xué)工程指導(dǎo)教師:史清洪;陳藍(lán)天20090501摘要新疆地處我國大西北,存在著很多的低溫環(huán)境(冰川和高山),為尋找低溫微生物供了理想的采樣區(qū)域。低溫微生物所產(chǎn)的酶大多是低溫酶。低溫酶能在低澄下有效發(fā)揮催化作用的特點(diǎn),使其在生物工程領(lǐng)域有蓿廣泛的應(yīng)用前景。因此,對低溫微生物的研究無論在理論上還是實(shí)踐上都有重要意義。本研究從來自新疆伊犁和阿勒泰地區(qū)的75份土樣中分離出產(chǎn)低溫脂肪酶的低溫菌6株.經(jīng)初篩和搖瓶復(fù)篩確定一株產(chǎn)低溫脂肪酶活力較高的蔬株N6-12作為進(jìn)一步研究的出發(fā)菌株
2、。菌株N6-12在完全培養(yǎng)基上20℃培養(yǎng)72h后,菌落白色、圓形、隆起、不透明、表面光滑、濕潤、邊緣波狀。菌體革蘭氏陰性、桿狀、能運(yùn)動(dòng)。常規(guī)生理生化測試表明,葭株N6-12兼性厭氧,最適生長溫度25℃,40℃以上不生長,氧化酶反應(yīng)陽性,接觸酶反應(yīng)陽性,不產(chǎn)H2S,明膠液化陽性,水解淀粉陰性,反硝化作用陽性,脂酶陽性,能利用葡萄糖、果糖。經(jīng)過16SrDNA鑒定,與假單胞菌有97.6%的相似度。結(jié)合形態(tài)學(xué)、生理生化特征和16SrDNA序列分析結(jié)果,初步認(rèn)定菌株N6-12屬.?。賳伟鷮伲瑫好麨镻seudomonassp.N6-12。對菌株N6-12產(chǎn)的脂肪酶的酶
3、學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究,結(jié)果表明該低溫脂肪酶的最適催化湓度為30℃,30℃’F處理120rain,酶活性仍有70%。該酶催化的最適pH6.5,在不同pHF的穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示,該酶在pH5.5--.8內(nèi)均較穩(wěn)定。金屬離子中,Cu2+、Fe升對酶有較大的抑制作用,Na+則對酶有激活作用。在搖瓶發(fā)酵水平上,對假單胞菌N6-12的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行了研究,確定了其最佳培養(yǎng)基成分及最佳培養(yǎng)條件。研究了不同碳源、氨源、無機(jī)鹽、產(chǎn)物、底物等岡素對假單胞蘸N6-12產(chǎn)酶的影響,發(fā)現(xiàn)玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量對產(chǎn)酶的影響較大。對玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量四因素各選取三個(gè)水平進(jìn)行
4、正交試驗(yàn),確定假單胞菌N6-12產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)基成分為玉米漿2%,豆粕粉3%、葡萄塘l%,裝填量為50ml/250nd。通過搖瓶發(fā)酵試驗(yàn),確定其最佳培養(yǎng)條件為:25℃,180r/rain,培養(yǎng)45h。在此條件下培養(yǎng),低溫脂肪酶酶活力達(dá)7.87U/mL,比優(yōu)化前提高了76.8%。關(guān)鍵詞:低溫脂肪酶:篩選:菌株鑒定:假單胞菌;酶學(xué)性質(zhì);產(chǎn)酶優(yōu)化AbstractAsoneofidealsamplingareaforcold-adaptedmicroorganisms,therearevariouslow-temtx'ratureenvironmentsinSmkian
5、g.wherewereadoptedforexistenceoflow-temperatureenzyme-producingmicroorganisms.Lowtemperatureellzyxllespe-rformbetterthananyothernormaltemperatureenzyll鹼sunderlowtemperature,therebyexhibitingagreatpotentialinbioengineering.Inthisthesis,aswamoflow-temperaturemicroorganismW8$collectedan
6、dcharacterizecLTheactivityoftipaseandfermentationconditionwereoptimizedforfln-therresearchSixlow-temperatureghainsusedinthisresearchworecollectedfrom75soilsamplesintwoSinkiang’dislriclsofHiandAletai.Aftertheprimaryscreenmgalow-temperaturelipaseproducingstrain(namedasN6-12)obtainedwas
7、usedinfollowingresearches.Afterculturedunder20℃for72h,thecolonyofthestrainN6-12onTYEGculturemediumwaswhile,round,uplifted.opaque,smoothandmoist.Thestrainwasgramnegative,rodshapeandlocomotion.TheresultsofbiochemistryandphysiologytestshowedthatthebesttemperatureforitsgrowthWas25"Candth
8、egrowthWasin