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《禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)外表達差異的研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)外表達差異的研究姓名:高清清申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:高崧;劉秀梵20100501高清清:禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)!外表達差異的研究于葡芰尿道感染是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見病,40%一50%的婦女至少經(jīng)歷過一次尿道感染,臨床表現(xiàn)多樣(尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等),僅在美國,每年即有大約8百萬人罹患該病,住院患者約30萬。迄今,尿道致病性大腸桿菌(uropathogeni
2、cEscherichiacoli,UPEC)是所有尿道感染中最常見的病原體。禽大腸桿菌病是部分或全部由禽病原性大腸桿菌(avianpathogenicEscherichiacoli,APEC)引起的局部或全身性感染的疾病,包括大腸桿菌性敗血癥、大腸桿菌肉芽腫(HjRITe氏病)、氣囊病(慢性呼吸道病,CRD)、禽蜂窩織炎、腫頭綜合癥、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎及臍炎/卵黃囊感染。APEC和UPEC均能引起腸道外感染,具有廣泛的致病潛能?;谶@種廣泛的致病潛能,UPEC和APEC被歸為新型致病性大腸桿菌——腸道外病原性大腸桿
3、菌(extraintestinalpathogenicEscherichiacoli,ExPEC)。APEC和UPEC引起腸道外感染可能與它們的毒力特性有關(guān),如黏附素、鐵攝取系統(tǒng)、毒素、保護素和侵襲素等,這些毒力特性使它們能夠在宿主環(huán)境中生存進而產(chǎn)生疾病。諸多研究證明,APEC和UPEC的毒力因子之間存在著一定的相似性。本研究選取代表性APEC、UPEC分離株,比較它們的種系發(fā)生分型及毒力基因的分布,并通過SPF雞對它們的致病性進行鑒定,同時比較APEC和UPEC在雞和小鼠體內(nèi)外競爭性生長情況;通過感染實驗小鼠和雞,應(yīng)用相對定量反
4、轉(zhuǎn)錄PCR測定受試毒力基因在體內(nèi)的表達水平,從而揭示APEC、UPEC毒力基因在同~宿主體內(nèi)的表達規(guī)律,最終為弄清APEC與UPEC是否作為對方毒力基因貯庫這一關(guān)鍵問題提供依據(jù)。相對定量PCR對APEC和Ⅵ,EC毒力基因在體內(nèi)表達水平的檢測結(jié)果,結(jié)合PCR檢測毒力基因的分布以及對SPF雞致病性試驗的結(jié)果,說明APEC和UPEC在毒力基因方面的相關(guān)性。1.APECE516株和UPECU56株毒力、毒力基因相關(guān)性的研究選取同屬01血清型禽致病性大腸桿菌分離株E516和人尿道致病性大腸桿菌揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文U56株,應(yīng)用單一和多重PC
5、R技術(shù)比較它們的種系發(fā)生分型及毒力基因的分布,并通過SPF雞對它們的致病性進行鑒定,同時以腸出血性大腸桿菌代表菌株933和非致病性大腸桿菌代表菌株K.12MGl655作對照;并比較APECE516株和UPECU56株在雞和小鼠體內(nèi)外競爭性生長情況。結(jié)果顯示,E516株和U56株種系發(fā)生型一致,在毒力基因相似性高:對1日齡SPF雞致病力測定結(jié)果表明U56株能產(chǎn)生與E516株相似的病變,但是致病力略低于E516;雞和小鼠體內(nèi)競爭性試驗結(jié)果顯示U56競爭力略低于E516,這可能與兩者仍存在不同的已知或未知的毒力因子有關(guān)。上述研究部分佐證
6、了APEC可能是UPEC的來源或UPEC的毒力基因儲存庫的推論。2.檢測ompT和.屜以相對定量PCR方法的建立及其在體內(nèi)外表達水平的解析本研究用嵌合熒光(SYBRGreenI)標(biāo)記,以編碼甘油醛3.磷酸脫氫酶的看家基因gapA為內(nèi)參基因,建立了用于ompT和乃DB基因表達水平解析的兩步法實時定量反轉(zhuǎn)錄PCR(reaatimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,qRT-PCR)。運用該定量PCR分別建立了內(nèi)參基因gapA和目的基因ompT與屜D曰的3個標(biāo)準(zhǔn)
7、曲線,這些標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和線性關(guān)系均符合要求,表明所建立的定量PCR體系的擴增效率高、定量準(zhǔn)確。定量PCR對ompT和.店DB基因在感染雞體內(nèi)及小鼠體內(nèi)的表達水平的解析結(jié)果表明,相對于體外培養(yǎng),APECE516株ompT在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達分別上調(diào)了3.73和1.45倍,弦拈在雞體內(nèi)上調(diào)了1.30倍,在小鼠體內(nèi)表現(xiàn)下調(diào)趨勢,下調(diào)率為0.84;UPECU56株ompT在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達分別上調(diào)了1.52和2.57倍,.居DB在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達分別上調(diào)了2.15和1.37倍;而對照菌株EHEC933和K-12ompT與
8、.尼柏在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達均表現(xiàn)下調(diào)。上述結(jié)果提示我們,APEC、UPEC毒力基因ompT和feoB在雞攻毒模型和小鼠尿道感染模型中的表達水平基本一致,多表現(xiàn)為上調(diào),即它們可能是APEC和UPEC的致病基因。關(guān)鍵詞:禽病原性大腸桿菌;尿道致病性