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《禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)外表達(dá)差異的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)外表達(dá)差異的研究姓名：高清清申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：高崧;劉秀梵20100501高清清：禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)!外表達(dá)差異的研究于葡芰尿道感染是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見病，40％一50％的婦女至少經(jīng)歷過(guò)一次尿道感染，臨床表現(xiàn)多樣(尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等)，僅在美國(guó)，每年即有大約8百萬(wàn)人罹患該病，住院患者約30萬(wàn)。迄今，尿道致病性大腸桿菌(uropathogeni
2、cEscherichiacoli，UPEC)是所有尿道感染中最常見的病原體。禽大腸桿菌病是部分或全部由禽病原性大腸桿菌(avianpathogenicEscherichiacoli，APEC)引起的局部或全身性感染的疾病，包括大腸桿菌性敗血癥、大腸桿菌肉芽腫(HjRITe氏病)、氣囊病(慢性呼吸道病，CRD)、禽蜂窩織炎、腫頭綜合癥、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎及臍炎／卵黃囊感染。APEC和UPEC均能引起腸道外感染，具有廣泛的致病潛能?；谶@種廣泛的致病潛能，UPEC和APEC被歸為新型致病性大腸桿菌——腸道外病原性大腸桿
3、菌(extraintestinalpathogenicEscherichiacoli，ExPEC)。APEC和UPEC引起腸道外感染可能與它們的毒力特性有關(guān)，如黏附素、鐵攝取系統(tǒng)、毒素、保護(hù)素和侵襲素等，這些毒力特性使它們能夠在宿主環(huán)境中生存進(jìn)而產(chǎn)生疾病。諸多研究證明，APEC和UPEC的毒力因子之間存在著一定的相似性。本研究選取代表性APEC、UPEC分離株，比較它們的種系發(fā)生分型及毒力基因的分布，并通過(guò)SPF雞對(duì)它們的致病性進(jìn)行鑒定，同時(shí)比較APEC和UPEC在雞和小鼠體內(nèi)外競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)情況；通過(guò)感染實(shí)驗(yàn)小鼠和雞，應(yīng)用相對(duì)定量反
4、轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定受試毒力基因在體內(nèi)的表達(dá)水平，從而揭示APEC、UPEC毒力基因在同～宿主體內(nèi)的表達(dá)規(guī)律，最終為弄清APEC與UPEC是否作為對(duì)方毒力基因貯庫(kù)這一關(guān)鍵問(wèn)題提供依據(jù)。相對(duì)定量PCR對(duì)APEC和Ⅵ，EC毒力基因在體內(nèi)表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合PCR檢測(cè)毒力基因的分布以及對(duì)SPF雞致病性試驗(yàn)的結(jié)果，說(shuō)明APEC和UPEC在毒力基因方面的相關(guān)性。1．APECE516株和UPECU56株毒力、毒力基因相關(guān)性的研究選取同屬01血清型禽致病性大腸桿菌分離株E516和人尿道致病性大腸桿菌揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文U56株，應(yīng)用單一和多重PC
5、R技術(shù)比較它們的種系發(fā)生分型及毒力基因的分布，并通過(guò)SPF雞對(duì)它們的致病性進(jìn)行鑒定，同時(shí)以腸出血性大腸桿菌代表菌株933和非致病性大腸桿菌代表菌株K．12MGl655作對(duì)照；并比較APECE516株和UPECU56株在雞和小鼠體內(nèi)外競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示，E516株和U56株種系發(fā)生型一致，在毒力基因相似性高：對(duì)1日齡SPF雞致病力測(cè)定結(jié)果表明U56株能產(chǎn)生與E516株相似的病變，但是致病力略低于E516；雞和小鼠體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)結(jié)果顯示U56競(jìng)爭(zhēng)力略低于E516，這可能與兩者仍存在不同的已知或未知的毒力因子有關(guān)。上述研究部分佐證
6、了APEC可能是UPEC的來(lái)源或UPEC的毒力基因儲(chǔ)存庫(kù)的推論。2．檢測(cè)ompT和．屜以相對(duì)定量PCR方法的建立及其在體內(nèi)外表達(dá)水平的解析本研究用嵌合熒光(SYBRGreenI)標(biāo)記，以編碼甘油醛3．磷酸脫氫酶的看家基因gapA為內(nèi)參基因，建立了用于ompT和乃DB基因表達(dá)水平解析的兩步法實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄PCR(reaatimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,qRT-PCR)。運(yùn)用該定量PCR分別建立了內(nèi)參基因gapA和目的基因ompT與屜D曰的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)
7、曲線，這些標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和線性關(guān)系均符合要求，表明所建立的定量PCR體系的擴(kuò)增效率高、定量準(zhǔn)確。定量PCR對(duì)ompT和．店DB基因在感染雞體內(nèi)及小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平的解析結(jié)果表明，相對(duì)于體外培養(yǎng)，APECE516株ompT在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)分別上調(diào)了3．73和1．45倍，弦拈在雞體內(nèi)上調(diào)了1．30倍，在小鼠體內(nèi)表現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，下調(diào)率為0．84；UPECU56株ompT在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)分別上調(diào)了1．52和2．57倍，．居DB在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)分別上調(diào)了2．15和1．37倍；而對(duì)照菌株EHEC933和K-12ompT與
8、．尼柏在雞體內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)均表現(xiàn)下調(diào)。上述結(jié)果提示我們，APEC、UPEC毒力基因ompT和feoB在雞攻毒模型和小鼠尿道感染模型中的表達(dá)水平基本一致，多表現(xiàn)為上調(diào)，即它們可能是APEC和UPEC的致病基因。關(guān)鍵詞：禽病原性大腸桿菌；尿道致病性
