從槐花米中提取蘆丁

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1、現(xiàn)代化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)1從槐花米中提取蘆丁一、目的要求（1）學(xué)習(xí)從天然產(chǎn)物中提取黃酮苷的原理和方法。（2）學(xué)習(xí)重結(jié)晶提純固體物質(zhì)的原理和方法。（3）掌握黃酮苷的紙色譜檢驗(yàn)操作。二、實(shí)驗(yàn)原理蘆丁又稱蕓香苷，廣泛存在于植物中，其中槐花米中的含量達(dá)12%～16%。蘆丁有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管壁滲透性的作用，臨床用作毛細(xì)血管止血藥，也作為高血壓癥的輔助治療藥物。蘆丁是糖苷類(lèi)化合物，常含三分子結(jié)晶水，呈淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為174～178°C，無(wú)水物的熔點(diǎn)為188°C。蘆丁在冷水中的溶解度為1:10000，沸水中為1:

2、200；冷乙醇中為1:650，沸乙醇中為1:60；易溶于堿性水溶液，難溶于酸性水溶液，幾乎不溶于苯、乙醚、氯仿等。本實(shí)驗(yàn)是利用蘆丁易溶于堿性水溶液、酸化后又析出的性質(zhì)進(jìn)行提取，并利用它在冷水中和熱水中溶解度相差較大的特性進(jìn)行重結(jié)晶提純。蘆丁是糖苷類(lèi)化合物，其糖苷鍵在酸性條件下可水解產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的甙元——槲皮素，所以蘆丁的分離鑒定可用紙色譜進(jìn)行，常用乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）或正丁醇:冰醋酸:水（4:1:5）作展開(kāi)劑。三、主要儀器和試劑1.主要試劑槐花米、石灰乳、濃鹽酸、pH試紙、質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙

3、醇、展開(kāi)劑（乙酸乙酯:甲酸:水=6:1:3）、顯色劑（質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%三氯化鋁）、飽和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液、飽和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液。2.主要儀器250mL燒杯、500mL燒杯、抽濾瓶、布氏漏斗、濾紙、表面皿、毛細(xì)管、鉛筆、直尺、色譜濾紙（中速、20cm×7cm）、色譜缸、烘箱、電爐、臺(tái)平。四、操作步驟1.蘆丁的提取取10g槐花米，置于250mL燒杯中，加入100mL水，煮沸，在攪拌下緩緩加入石灰乳至pH=8～9，在此pH下保持微沸20～30min，趁熱抽濾，殘?jiān)偌?0mL水，同上法再煎一次，趁熱抽濾

4、。合并濾液，在60～70°C下用濃HCl調(diào)至pH=4～5，使沉淀完全，抽濾，沉淀用少量蒸餾水洗滌，抽干，60°C干燥得粗蘆丁。2.蘆丁的精制用水重結(jié)晶：將粗蘆丁置500mL燒杯中，加入適量蒸餾水，加熱煮沸，趁熱抽濾。濾液靜置，充分冷卻，析出蘆丁晶體，抽濾，產(chǎn)品用蒸餾水洗滌，70～80°C烘干，稱重，得蘆丁產(chǎn)品。3.蘆丁的紙色譜檢驗(yàn)樣品：飽和蘆丁自制品乙醇溶液。對(duì)照品：飽和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液和飽和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液。支持劑：色譜濾紙（中速，20cm×7cm）。展開(kāi)劑：乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3

5、）。顯色劑：質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%三氯化鋁噴霧。5五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、粗蘆丁為土黃色粉末，精制后的蘆丁產(chǎn)品為淡黃色粉末。m(槐花米)/gm(蘆丁)/g產(chǎn)率/%100.35503.52、產(chǎn)率：3、蘆丁紙色譜顯色中：在色譜中，對(duì)照品飽和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液有明顯顯色現(xiàn)象，飽和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液顯色不明顯；樣品飽和蘆丁自制品乙醇溶液有顯色，但其顯色最高點(diǎn)和槲皮素顯色點(diǎn)高度不一致，最低點(diǎn)顯色不明顯。六、分析與討論1、蘆丁顏色正常，因?yàn)榇痔J丁中海混有雜質(zhì)，所以顏色較精制后蘆丁深。2、精制蘆丁產(chǎn)率較低，可能是因?yàn)椋撼藷岢闉V

6、時(shí)溶液溫度下降，蘆丁析出留在濾紙上；還有部分蘆丁未從槐花米中煮出；蘆丁轉(zhuǎn)移過(guò)程中損失等等。3、實(shí)驗(yàn)所需槐花米粉碎太細(xì)，導(dǎo)致抽濾十分緩慢，因而本實(shí)驗(yàn)后來(lái)用紗布代替濾紙。4、本來(lái)還應(yīng)有一個(gè)粗產(chǎn)率，但因?yàn)閷?shí)驗(yàn)考慮不周全，沒(méi)有測(cè)定粗蘆丁質(zhì)量，所以蘆丁粗產(chǎn)率無(wú)法計(jì)算得到。5、紙色譜顯色：飽和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液所有組都沒(méi)有顯色，可能是制備標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)蘆丁濃度太低；槲皮素顯色正常，沒(méi)有問(wèn)題；樣品飽和蘆丁自制品乙醇溶液顯色不明顯，可能是精制蘆丁混有雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)2分光光度法測(cè)定蔬菜總鐵量一、目的要求（1）學(xué)習(xí)鄰二氮菲分

7、光光度法測(cè)定鐵的原理和方法，掌握分光光度計(jì)的使用。（2）掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法。（3）掌握樣品的灰化方法及高溫爐的使用。二、實(shí)驗(yàn)原理在紫外-可見(jiàn)區(qū)電磁輻射的作用下，多原子分子的價(jià)電子發(fā)生躍遷，從而產(chǎn)生分子的吸收光譜。各種物質(zhì)的分子都有其特征的吸收光譜，以此來(lái)獲得定性的信息。而在選定波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度A與物質(zhì)濃度c的關(guān)系，可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定。分光光度法測(cè)定的基本原理是依據(jù)朗伯-比爾定律，即式中T為透光率；I0為入射光強(qiáng)度；I為透射光強(qiáng)度；l為吸收池厚度；c為濃度；K為吸光系數(shù)。當(dāng)入射光波長(zhǎng)及吸收池厚

8、度一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比。用分光光度法測(cè)定物質(zhì)的含量，一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，即配制一系列濃度由小到大的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在指定條件下依次測(cè)量各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸光度與其濃度呈直線關(guān)系。以溶液的濃度c為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定未知試樣時(shí)，操作條件與標(biāo)準(zhǔn)曲線上的相同，根據(jù)測(cè)得的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度，就可計(jì)算出試樣中被測(cè)物的含量。測(cè)定時(shí)5通常以試劑空白溶液為參比溶液，調(diào)校儀器的吸光