PGC基因插入-缺失多態(tài)片段調控基因表達功能及其機制研究

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1、分類號：R730.231單位代碼：10159密級：公開學號：200910178博士學位論文中文題目：PGC基因插入/缺失多態(tài)片段調控基因表達功能及其機制研究英文題目：ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression論文作者：寧佩芳指導教師：袁媛學科專業(yè)：腫瘤學完成時間：2018年10月中國醫(yī)科大學博士學位論文PGC基因插入/缺失多態(tài)片段調控基因表達功能及其機

2、制研究ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression論文作者寧佩芳指導教師袁媛申請學位醫(yī)學博士培養(yǎng)單位中國醫(yī)科大學第一臨床學院一級學科臨床醫(yī)學二級學科腫瘤學研究方向胃癌早期診斷基礎研究論文起止時間2009年12月—2015年12月論文完成時間2018年10月中國醫(yī)科大學（遼寧）2018年10月I中國醫(yī)科大學博士學位論文摘要目的：胃蛋白酶原C（PGC）是胃黏

3、膜特異性功能酶-胃蛋白酶的前體，屬于天冬氨酸蛋白酶家族的內切蛋白酶，是胃黏膜細胞分化成熟的終末產物。PGC基因7、8外顯子間的內含子區(qū)存在100bp的插入/缺失多態(tài)片段，攜帶PGC等位基因1純合型者罹患胃癌和萎縮性胃炎的風險顯著增加。PGC基因插入/缺失多態(tài)性與胃癌遺傳易感性顯著相關，可以作為胃癌高風險個體的預警標志。目前，其確切致癌機制尚不清楚，有待探討。某些內含子具有調節(jié)基因啟動子活性的功能，某些內含子具有啟動子活性。根據DNA序列分析發(fā)現(xiàn)PGC基因插入/缺失多態(tài)片段內含有TATA盒樣序列。TA

4、TA盒對決定轉錄起始的位置起著至關重要的作用，由TATA盒及轉錄起始點即可構成最簡單的啟動子。某些含有TATA盒結構的內含子區(qū)特異性序列也具有啟動子功能，TATA盒突變或改變與轉錄起始點的距離都會導致轉錄在其它位置起始，從而在轉錄水平影響基因表達。那么，PGC基因插入/缺失片段是否具有啟動子活性或者其是否具有調節(jié)基因啟動子活性的能力呢？這一問題需要深入研究。另外，DNA序列中TATA盒多為轉錄因子結合位點，能與轉錄因子相結合,參與轉錄因子相互作用調控基因的轉錄過程。是否PGC基因插入/缺失多態(tài)片段通

5、過影響轉錄因子結合能力導致其啟動子活性差異，進而影響基因表達水平，亦需進一步研究證實。本研究旨在通過研究PGC基因插入/缺失多態(tài)片段啟動子活性及轉錄調控功能，明確其對基因表達的調控作用。期望通過本項研究，為系統(tǒng)闡明PGC基因多態(tài)與胃癌遺傳易感性的關系，建立有效的胃癌高風險個體預警標志提供有價值的實驗依據及理論參考。同時，為進一步探討了PGC與其他胃癌標志物的聯(lián)合檢測的意義，我們探討胃黏膜分化蛋白PGC和胃癌相關抗原MG7聯(lián)合表達預測胃癌和胃癌前病變進展風險的價值。方法：1.采用Real-timePC

6、R方法分別特異性擴增不同基因型的PGC基因及8-9外顯子的mRNA,采用SP免疫組織化學染色檢測不同胃黏膜組織PGC蛋白表達情況，比較不同的PGC基因插入/缺失多態(tài)片段對PGC基因表達有何影響。2.構建PGC基因插入型及缺失型以及PGC基因啟動子4200bp的熒光素酶表達載體，利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)測定PGC基因插入型、缺失型、啟動子以及插入型+啟動子和缺失型+啟動子各組的熒光素酶活性，比較分析不同多態(tài)片段啟動II中國醫(yī)科大學博士學位論文子活性的差異及其對PGC基因啟動子活性調節(jié)能力的差異。3.

7、生物信息學預測與PGC基因插入/缺失多態(tài)片段結合的轉錄因子；采用EMSA方法檢測PGC基因插入/缺失多態(tài)片段是否能與轉錄因子特異性結合。4.采用SP免疫組化染色檢測同一胃粘膜活檢標本中PGC和MG7蛋白共同表達情況。繪制ROC曲線計算胃癌及其癌前病變診斷效能。對研究對象進行隨訪研究。結果：1.PGCmRNA在胃癌組的表達水平顯著低于非癌組（F=40.772）。非癌人群中，等位基因1純合型組PGCmRNA的表達顯著低于等位基因1雜合型（F=2.038）和其它型組（F=5.550）；等位基因1雜合型組顯

8、著低于其它型組（F=3.503）。胃癌人群中，等位基因1純合型組PGC基因mRNA表達顯著低于等位基因1雜合型（F=9.420）和其它型組（F=2.138）；PGC基因8-9外顯子表達率各組間差異無統(tǒng)計學意義（F=1.329,F=1.866）。從其它型→等位基因1雜合型→等位基因1純合型，PGC蛋白陽性表達率依次逐漸降低，等位基因1純合型組與其它型組間差異有統(tǒng)計學意義（p=0.009），經年齡性別調整OR值為2.114(95%CI1.177-3.817)；GS組PGC