PGC基因插入-缺失多態(tài)片段調(diào)控基因表達(dá)功能及其機(jī)制研究

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1、分類號(hào)：R730.231單位代碼：10159密級(jí)：公開學(xué)號(hào)：200910178博士學(xué)位論文中文題目：PGC基因插入/缺失多態(tài)片段調(diào)控基因表達(dá)功能及其機(jī)制研究英文題目：ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression論文作者：寧佩芳指導(dǎo)教師：袁媛學(xué)科專業(yè)：腫瘤學(xué)完成時(shí)間：2018年10月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文PGC基因插入/缺失多態(tài)片段調(diào)控基因表達(dá)功能及其機(jī)

2、制研究ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression論文作者寧佩芳指導(dǎo)教師袁媛申請(qǐng)學(xué)位醫(yī)學(xué)博士培養(yǎng)單位中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院一級(jí)學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科腫瘤學(xué)研究方向胃癌早期診斷基礎(chǔ)研究論文起止時(shí)間2009年12月—2015年12月論文完成時(shí)間2018年10月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)（遼寧）2018年10月I中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文摘要目的：胃蛋白酶原C（PGC）是胃黏

3、膜特異性功能酶-胃蛋白酶的前體，屬于天冬氨酸蛋白酶家族的內(nèi)切蛋白酶，是胃黏膜細(xì)胞分化成熟的終末產(chǎn)物。PGC基因7、8外顯子間的內(nèi)含子區(qū)存在100bp的插入/缺失多態(tài)片段，攜帶PGC等位基因1純合型者罹患胃癌和萎縮性胃炎的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。PGC基因插入/缺失多態(tài)性與胃癌遺傳易感性顯著相關(guān)，可以作為胃癌高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體的預(yù)警標(biāo)志。目前，其確切致癌機(jī)制尚不清楚，有待探討。某些內(nèi)含子具有調(diào)節(jié)基因啟動(dòng)子活性的功能，某些內(nèi)含子具有啟動(dòng)子活性。根據(jù)DNA序列分析發(fā)現(xiàn)PGC基因插入/缺失多態(tài)片段內(nèi)含有TATA盒樣序列。TA

4、TA盒對(duì)決定轉(zhuǎn)錄起始的位置起著至關(guān)重要的作用，由TATA盒及轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)即可構(gòu)成最簡(jiǎn)單的啟動(dòng)子。某些含有TATA盒結(jié)構(gòu)的內(nèi)含子區(qū)特異性序列也具有啟動(dòng)子功能，TATA盒突變或改變與轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的距離都會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄在其它位置起始，從而在轉(zhuǎn)錄水平影響基因表達(dá)。那么，PGC基因插入/缺失片段是否具有啟動(dòng)子活性或者其是否具有調(diào)節(jié)基因啟動(dòng)子活性的能力呢？這一問(wèn)題需要深入研究。另外，DNA序列中TATA盒多為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，能與轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合,參與轉(zhuǎn)錄因子相互作用調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。是否PGC基因插入/缺失多態(tài)片段通

5、過(guò)影響轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合能力導(dǎo)致其啟動(dòng)子活性差異，進(jìn)而影響基因表達(dá)水平，亦需進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究旨在通過(guò)研究PGC基因插入/缺失多態(tài)片段啟動(dòng)子活性及轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能，明確其對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用。期望通過(guò)本項(xiàng)研究，為系統(tǒng)闡明PGC基因多態(tài)與胃癌遺傳易感性的關(guān)系，建立有效的胃癌高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體預(yù)警標(biāo)志提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論參考。同時(shí)，為進(jìn)一步探討了PGC與其他胃癌標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)的意義，我們探討胃黏膜分化蛋白PGC和胃癌相關(guān)抗原MG7聯(lián)合表達(dá)預(yù)測(cè)胃癌和胃癌前病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的價(jià)值。方法：1.采用Real-timePC

6、R方法分別特異性擴(kuò)增不同基因型的PGC基因及8-9外顯子的mRNA,采用SP免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)不同胃黏膜組織PGC蛋白表達(dá)情況，比較不同的PGC基因插入/缺失多態(tài)片段對(duì)PGC基因表達(dá)有何影響。2.構(gòu)建PGC基因插入型及缺失型以及PGC基因啟動(dòng)子4200bp的熒光素酶表達(dá)載體，利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)測(cè)定PGC基因插入型、缺失型、啟動(dòng)子以及插入型+啟動(dòng)子和缺失型+啟動(dòng)子各組的熒光素酶活性，比較分析不同多態(tài)片段啟動(dòng)II中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文子活性的差異及其對(duì)PGC基因啟動(dòng)子活性調(diào)節(jié)能力的差異。3.

7、生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與PGC基因插入/缺失多態(tài)片段結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子；采用EMSA方法檢測(cè)PGC基因插入/缺失多態(tài)片段是否能與轉(zhuǎn)錄因子特異性結(jié)合。4.采用SP免疫組化染色檢測(cè)同一胃粘膜活檢標(biāo)本中PGC和MG7蛋白共同表達(dá)情況。繪制ROC曲線計(jì)算胃癌及其癌前病變?cè)\斷效能。對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行隨訪研究。結(jié)果：1.PGCmRNA在胃癌組的表達(dá)水平顯著低于非癌組（F=40.772）。非癌人群中，等位基因1純合型組PGCmRNA的表達(dá)顯著低于等位基因1雜合型（F=2.038）和其它型組（F=5.550）；等位基因1雜合型組顯

8、著低于其它型組（F=3.503）。胃癌人群中，等位基因1純合型組PGC基因mRNA表達(dá)顯著低于等位基因1雜合型（F=9.420）和其它型組（F=2.138）；PGC基因8-9外顯子表達(dá)率各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.329,F=1.866）。從其它型→等位基因1雜合型→等位基因1純合型，PGC蛋白陽(yáng)性表達(dá)率依次逐漸降低，等位基因1純合型組與其它型組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.009），經(jīng)年齡性別調(diào)整OR值為2.114(95%CI1.177-3.817)；GS組PGC