核醫(yī)學(xué)體外分析教案-北大

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1、第一節(jié)放射免疫分析—>原理(一)基本原理放射免疫分析(R1A)的基礎(chǔ)是放射性核索標(biāo)記的抗原(radionuclidelabeledantigen)和非標(biāo)記抗原(unlabeledantigen)(標(biāo)準(zhǔn)抗原或被測抗原)同時與限量的特異性抗體(specificantibody)進(jìn)行競爭性免疫結(jié)合反應(yīng)(competitiveimmunebindingreaction),其競爭關(guān)系可用下式表示:Ag+Ab

2、Ag與Ag的免疫活性完全相同，對Ab具有同樣的親和力，當(dāng)*人8和Ab為恒定量，的總量大于Ab上的有效結(jié)合點(diǎn)時，*Ag-Ab的形成是隨著Ag量的增加而減少，剩下來的未結(jié)合或游離的*Ag則隨著Ag量的增加而增加，稱為競爭結(jié)合反應(yīng)(competitivebindingreaction),因此測定*Ag-Ab或*人盤即可OO0^08SSS=空■■■■55??OOOOOOOOOOOOOOOOOOB3>推出被測的Ag量(圖13-1)o圖13-1放射免疫分析原理示意圖(―)標(biāo)準(zhǔn)曲線配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原，分別向其中加入固定量的標(biāo)記抗原和抗體，反應(yīng)平衡后，分離抗原的結(jié)合部分和游離部分，測

3、定*Ag-Ab的放射性B或游離*Ag的放射性F,計算出結(jié)合率B%[B/(B+F)X100%]或其他指標(biāo),如B/Bo%(Bo表示不含非標(biāo)記抗原管的最人結(jié)合放射性)。以B%或B/B。%為縱座標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)抗原的濃度為橫座標(biāo)，繪制曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線(standardcurve)(圖13-2)o依同法測得被測樣品的B%或B/Bo%,即可從此標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品中被測抗原的濃度。標(biāo)建曲線d以B/映％為縱底你的你扈曲線b.以為(M冷祐的休廈曲線圖13-2標(biāo)準(zhǔn)曲線二、基本條件一(-)特異性抗體1.抗體親和力抗體親和力(antibodyaffinity)是抗體與抗原之間相互作用的一種結(jié)合能力或強(qiáng)度。親和

4、力大即免疫結(jié)合既快又牢固，不易重新解離。kiAg+Ab

5、曲線上查得。1.抗體特異性指抗體分別與相應(yīng)抗原和抗原結(jié)構(gòu)類似物的結(jié)合能力的比較?？贵w與相應(yīng)抗原結(jié)合能力強(qiáng)，而與該抗原結(jié)構(gòu)類似物結(jié)合能力弱，則特異性高?？贵w與抗原結(jié)構(gòu)類似物的結(jié)合稱交叉反應(yīng)(crossreaction)0501002004008001600周知(nR/nl)交叉反應(yīng)試臉交叉反應(yīng)率二ED5o(B)/ED50(A)X100%(圖13-4)。圖13-4交叉反應(yīng)試驗(yàn)2.抗血清滴度以免疫反應(yīng)屮所需抗血清(antiserum)的稀釋度的倒數(shù)來表示，稀釋倍數(shù)越高，滴度(titer)越高，表示抗體的效價越高。在實(shí)際工作中要找出抗血清的最適稀釋度，即與抗原比例最適當(dāng)、檢測抗原特異性

6、最高、標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率最大的稀釋度(圖13-5)o10001600025600409600抗血材稀釋倍數(shù)抗血清滴度曲線圖13-5抗血清滴度曲線測定方法：將抗血清稀釋成不同濃度，分別加入怕晁標(biāo)記抗原，經(jīng)溫冇后分離B、F,求出不同稀釋度的B%,以稀釋度為橫座標(biāo),B%為縱座標(biāo),繪制出抗血清滴度曲線(antiserumtitercurve),一般以B%為30%?50%的抗體稀釋度為最適稀釋度。(-)標(biāo)記抗原對標(biāo)記抗原的要求：1.比活度(specificactivity):比活度越高，靈敏度越高。2.放射化學(xué)純度(radiochemicalpurity):指具冇免疫活性的標(biāo)記抗原的放射性占總

7、放射性的百分率.一般耍求大于95%O3.免疫活性：蛋白質(zhì)分子上標(biāo)記過多的碘原子就可能引起免疫活性的改變，一般以每個蛋口質(zhì)分子上只標(biāo)1?2個1251原子為宜。4.穩(wěn)定性。(三)標(biāo)準(zhǔn)品_1.對標(biāo)準(zhǔn)品的要求2.在與抗體發(fā)生反應(yīng)時，應(yīng)與被測物具有相等的活性和親和力3.高度純化4.定量精確2.標(biāo)準(zhǔn)品的級別國家標(biāo)準(zhǔn):是高度純化的標(biāo)準(zhǔn)品，并與各國的標(biāo)準(zhǔn)及世界衛(wèi)生組織(WIIO)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行過比對，作為國家的基準(zhǔn)。藥盒標(biāo)準(zhǔn)：是一般純化的標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)與國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：使用單位自行配置的標(biāo)準(zhǔn)品，其小抗原