實(shí)驗(yàn)室常用菌株及特性

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1、一、實(shí)驗(yàn)室常見菌株簡介Xl1-Blue菌株基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質(zhì)粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特點(diǎn)：該菌株用于以T7RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶

2、基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。BL21(DE3)ply菌株基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特點(diǎn)：該菌株帶有pLysS，具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)DH5α菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRn

3、upGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍Ｆ洇?0dlacZΔM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(r

4、K-mK+)。特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá),可用于M13克隆序列測定和藍(lán)白斑篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。DH10B菌株基因型：F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15ΔlacX74endA1recA1deoRΔ(ara,leu)7697araD139galUgalKnupGrpsLλ-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDH10B。hostforpUCandotherα-complementationvectors;pBR322usef

5、ulforgeneratinggenomiclibrariescontainingmethylatedcytosineoradenineresidues，usefulforplasmidrescueprocedures。ELECTROMAXDH10BT1CELLS說明：DH10B細(xì)胞是高轉(zhuǎn)化效率的E.coli，可以完美應(yīng)用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。DH10B基因型具有以下特點(diǎn)：lacZΔM15用于重組克隆的藍(lán)/白斑篩選消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系統(tǒng)，允許構(gòu)建更多具有代表性的基因組文庫(1,2)endA1突變，可以增加質(zhì)粒產(chǎn)量和

6、數(shù)量?高效率轉(zhuǎn)化大小為150kb的質(zhì)粒，用于產(chǎn)生cDNA或基因組文庫DH10B?可以表達(dá)tonA的基因型，tonA能夠提供對T1和T5噬菌體感染的抗性(DH10B?T1R)。DH10B的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGDH10BT1R的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,l

7、eu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGtonARosetta(DE3)菌株首先來一些大腸桿菌表達(dá)的基本概念：一個完整的表達(dá)系統(tǒng)通常包括配套的表達(dá)載體和表達(dá)菌株，如果是特殊的誘導(dǎo)表達(dá)還包括誘導(dǎo)劑，如果是融合表達(dá)還包括純化系統(tǒng)或者Tag檢測等等。選擇表達(dá)系統(tǒng)通常要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩砜紤]，比如表達(dá)量高低，目標(biāo)蛋白的活性，表達(dá)產(chǎn)物的純化方法等等。主要?dú)w結(jié)在表達(dá)載體的選擇上。表達(dá)載體：我們關(guān)心的質(zhì)粒上的元件包括啟動子，多克隆位點(diǎn)，終止密碼，融合Tag（如果有的話），復(fù)制子，篩選標(biāo)記/報(bào)告基因等。通常，載體很貴，我們可以通過實(shí)驗(yàn)室之間交

8、換得到免費(fèi)的載體。但是要小心，輾轉(zhuǎn)多個實(shí)驗(yàn)室和多個實(shí)驗(yàn)室成員之手的載體是否保持原來的遺傳背景？MCS是否還是原來那個MCS？是我們要特別注意的。復(fù)制子