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《實驗室常用菌株及特性》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、一、實驗室常見菌株簡介Xl1-Blue菌株基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。特點：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特點：該菌株用于以T7RNA聚合酶為表達系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶
2、基因的表達受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達。用途：蛋白質表達。BL21(DE3)ply菌株基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特點：該菌株帶有pLysS，具有氯霉素抗性。此質粒還有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。用途：蛋白質表達DH5α菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRn
3、upGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特點：一種常用于質?？寺〉木?。其Φ80dlacZΔM15基因的表達產物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。用途：分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。JM109菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(r
4、K-mK+)。特點：部分抗性缺陷，適合重復基因表達,可用于M13克隆序列測定和藍白斑篩選。用途：分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。DH10B菌株基因型：F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15ΔlacX74endA1recA1deoRΔ(ara,leu)7697araD139galUgalKnupGrpsLλ-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDH10B。hostforpUCandotherα-complementationvectors;pBR322usef
5、ulforgeneratinggenomiclibrariescontainingmethylatedcytosineoradenineresidues，usefulforplasmidrescueprocedures。ELECTROMAXDH10BT1CELLS說明：DH10B細胞是高轉化效率的E.coli，可以完美應用于大多數(shù)實驗應用。DH10B基因型具有以下特點：lacZΔM15用于重組克隆的藍/白斑篩選消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系統(tǒng)，允許構建更多具有代表性的基因組文庫(1,2)endA1突變，可以增加質粒產量和
6、數(shù)量?高效率轉化大小為150kb的質粒，用于產生cDNA或基因組文庫DH10B?可以表達tonA的基因型，tonA能夠提供對T1和T5噬菌體感染的抗性(DH10B?T1R)。DH10B的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGDH10BT1R的基因型：F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,l
7、eu)7697galUgalKλ·rpsL(StrR)nupGtonARosetta(DE3)菌株首先來一些大腸桿菌表達的基本概念：一個完整的表達系統(tǒng)通常包括配套的表達載體和表達菌株，如果是特殊的誘導表達還包括誘導劑，如果是融合表達還包括純化系統(tǒng)或者Tag檢測等等。選擇表達系統(tǒng)通常要根據實驗目的來考慮，比如表達量高低，目標蛋白的活性，表達產物的純化方法等等。主要歸結在表達載體的選擇上。表達載體：我們關心的質粒上的元件包括啟動子，多克隆位點，終止密碼，融合Tag（如果有的話），復制子，篩選標記/報告基因等。通常，載體很貴，我們可以通過實驗室之間交
8、換得到免費的載體。但是要小心，輾轉多個實驗室和多個實驗室成員之手的載體是否保持原來的遺傳背景？MCS是否還是原來那個MCS？是我們要特別注意的。復制子
