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《溶藻弧菌HY9901血紅素結(jié)合蛋白HutB的原核表達及純化.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第34卷第3期2014年6月廣東海洋大學學報Jo啪a1ofGuangdongOceaIlUniVers時V．01．34No．3Jun．2014溶藻弧菌HY9901血紅素結(jié)合蛋白HutB的原核表達及純化、薛麗麗1’2一，龐歡瑛1’2’3，黃郁蔥1’2?，吳灶和2'3一，簡紀常1’2一，周澤軍1’2'3(1．廣東海洋大學水產(chǎn)學院，，2．廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室，，3．廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病害控制重點實驗室，廣東湛江524088；4．仲愷農(nóng)業(yè)工程學院，廣東廣州510225)摘要：為探究溶藻弧菌(所6砌口垃加oO砸c塒)HY9901血紅素結(jié)合
2、蛋白HutB作為疫苗候選抗原的可能性，采用PCR方法擴增礦劬；f聆D紗ffc淞HY9901^z，餾基因全長序列，克隆到pMDl8．T載體，經(jīng)雙酶切、連接后，定向插入到pET_28a(+)中，構(gòu)建原核表達載體pET_HutB，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中進行IPTG誘導表達。SDs．PAGE驗證后，優(yōu)化誘導表達條件和純化條件，并進行w色stem．blot分析。結(jié)果表明，HutB蛋白在Eco，f中誘導表達的最優(yōu)條件：0．4mmo兒IPTG，37℃誘導4h，表達的蛋白分子量與預(yù)期大小相符，主要以包涵體的形式存在，300mmol／L咪唑洗脫時效果最佳，能與鼠抗
3、His．tag單抗特異性結(jié)合。關(guān)鍵詞：溶藻弧；^“倡基因；原核表達；優(yōu)化；純化中圖分類號：s941文獻標志碼：A文章編號：1673—9159(2014)03．0047．05ProkaryoticExpressionandPuri行cationoftheRecombinantHemin-BindingProtein(HutB)of勵，如口銣D紗自．c以sstrainHY9901XUEL汕1’2P，PANGHuan—yin91，2r，HUANGYu-con91’2r，WUZao．he2，3'4，JIANJi．chan91，2一，ZHOUZe．junl，2，3(
4、1．凡，廳P一酷c0，，e：妒Q廠G”口愕如略Dc陽療確fVg坶f紗，勱口形f口餾524088，國fn口；2．G甜口餾面喀ProvincinlKI蠆Lnborntory可PnthogenicBiologynndEpidetnilogy如rAqucnicEconomicAnimnts，Z矗刪f口孵524088，劬f玎口；3物三日6DmfD杪Q廠D西e伽eCD門加盯f餾聲，．49甜口加眈伽D肌fc彳療砌口瓜∥(婦nngdo玎gHi曲erEdncalionInstntlttonS，Zhn吩i冊gs24鎖撼，Chin％4．zhongkaiUniverSil)，西彳
5、l呈7．fc“，脅，譬口玎d上均揚PP一，曙，G“口停辦D”510225，(協(xié)f玎口)Abstract：ToinvestigatetheprokaryoticexpressionandexploFethepossibilitiesasavaccinecandidateantigensofHutB矗DmⅣ口紅玎。紗f記淞HY9901，tlle廳材培genewasclonedbyPCR，andthenfollowedbydigestion，coIlllection，meprokaDroticeXpressionvectorpET_HutBwascons仃u．c
6、ted鋤∞ughdirectionalinseningintopET-28“+)，then昀nsfo加edinto西c加廊辦婦∞辦BL2l(DE3)with口TGinduction．ARerverificationofSDS．PAGEtheinductede)【pressionandpurificationconditionswasoptiIIlized鼬er．Theresultsshowedthat：TheoptimizationconditionofinducibleexpressionforHutBprotein抽E∞矗wasoptimazedat3
7、7℃for3ho娜，w主也0．4mmol／LIPTGT11ebestelutionconcentrationofiIIlidazolewas300mmol／L，andmeeXpressedproteinexistedinthefo吼ofinclusionbody．TherecombinantHutBmsionproteincouldbecoIIIbinedwithmouseami—His—T奴antibo“收稿日期：2014．03．20基金項目：國家科技支撐計劃(2012BADl7802、2012BADl7803)：廣東省自然科學基金(s201304001
8、4562)第一作者：薛麗麗(1989一)，女，碩士研究生，研究方向
