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1、中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志2014年4月第16卷第4期MMJC，Apr2014，Vol16，No．4不同體積濃度胎牛血清對大鼠髓核間充質(zhì)干細胞生物學特性的影響宋亮張寧關曉明陳輝馬迅【摘要】目的研究大鼠髓核間充質(zhì)干細胞(NPMSCs)體外培養(yǎng)的最佳血清體積濃度并探討椎間盤退變的機制。方法用膠原酶、胰酶序貫消化法從sD大鼠腰部和尾部的椎問盤組織中提取NPMSCs，并進行體外培養(yǎng)，將其傳代。①利用流式細胞儀對第3代傳代NPMSCs細胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105進行鑒定；②利用普通PCR鑒定體外
2、培養(yǎng)的NPMSCs細胞基因Sox2、Nanog的表達；③在37℃、21％O：、5％CO的細胞培養(yǎng)箱中用成骨、成軟骨、成脂培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)第3代傳代NPMSCs，2周以后，用染色劑對其染色，觀察其成脂、成骨、成軟骨能力。④在37oC、21％O：、5％CO：的細胞培養(yǎng)箱中用不同血清體積濃度(0％、5％、10％、20％、30％)的DMEM—F12血清培養(yǎng)液培養(yǎng)第3代傳代NPMSCs，72h后利用CCK一8法檢測細胞的增殖，并采用RT—PCR檢測細胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、SOX9的mRNA表達，借助流式細胞儀對細胞進
3、行細胞凋亡的檢測。結(jié)果①大鼠NPMSCs的成骨、成軟骨能力強，成脂能力較差，且其細胞表面高度表達CD29、CD90、CD105，低度表達CD24、CD34，細胞基因Sox2、Nanog高度表達。②隨著培養(yǎng)液血清體積濃度增加，OD值增大，NPM．SCs的凋亡率降低，細胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、SOX9基因的mRNA表達增加。結(jié)論①大鼠NPMSCs具有間充質(zhì)干細胞特性；②細胞外營養(yǎng)影響大鼠NPMSCs的增殖、分泌、凋亡?！娟P鍵詞】椎間盤退變髓核間充質(zhì)干細胞營養(yǎng)增殖凋亡Efectonbiologicalcharac
4、teristicsofratnucleuspulposusmesenchymalstemcellunderdiferentconcentrationfetalbovineserulnngLiang，ZhangⅣ，GuanXiaoming，eta1．ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheoptimumvolumeconcentrationofse131mforthecultureoftheratnucl
5、eusmes—enchymalstemcells(NPMSCs)invitroandthemechanismofintervertebraldiscdegeneration．MethodsNPMSCswasiso-latedandcuhuredfromthelumbarandcaudaloftheSDratsbyCollagenase，trypsinsequentialdigestionmethod，andthentheywereculturedsubcuhuredinvitro．①Flowcytomet
6、rywasusedtoidenti~thecellphenotypeCD29，CD34，CD24，CD90，CD105ofthethirdgenerationNPMSCs．②TheexpressionofSox2，NanogwereassessedbyPCR．(ThethirdgenerationNPMSCswereinducedandculturedbyosteogenesis，chondroblastomasandlipoblastcultureinincubatortll37℃，21％O2，5％CO
7、2condition．After2weeks，dyedthemandobservedtheabilityofosteoporosis，chondroblastomasandlipoblast．④Culturedthethirdgenera—tionNPMSCswithdiferentvolumeconcentrationsoftheDMEM-F12serum(0％，5％，10％，20％，30％)underconditionof37~C，21％02，5％C02for72hours．Thecellprolif
8、erationwasdetectedbyCCK-8methodindiferentgroups，andtheproteogly-canexpressionofthemRNAofSOX9，collagenII，wereassessedbyRT-PCR，andfloweytometrywasusedtodetectapoptosis．Results④TheosteogenicandcartilageabilityoftheratN
