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《不同體積濃度胎牛血清對(duì)大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志2014年4月第16卷第4期MMJC，Apr2014，Vol16，No．4不同體積濃度胎牛血清對(duì)大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響宋亮張寧關(guān)曉明陳輝馬迅【摘要】目的研究大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞(NPMSCs)體外培養(yǎng)的最佳血清體積濃度并探討椎間盤退變的機(jī)制。方法用膠原酶、胰酶序貫消化法從sD大鼠腰部和尾部的椎問盤組織中提取NPMSCs，并進(jìn)行體外培養(yǎng)，將其傳代。①利用流式細(xì)胞儀對(duì)第3代傳代NPMSCs細(xì)胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105進(jìn)行鑒定；②利用普通PCR鑒定體外
2、培養(yǎng)的NPMSCs細(xì)胞基因Sox2、Nanog的表達(dá)；③在37℃、21％O：、5％CO的細(xì)胞培養(yǎng)箱中用成骨、成軟骨、成脂培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)第3代傳代NPMSCs，2周以后，用染色劑對(duì)其染色，觀察其成脂、成骨、成軟骨能力。④在37oC、21％O：、5％CO：的細(xì)胞培養(yǎng)箱中用不同血清體積濃度(0％、5％、10％、20％、30％)的DMEM—F12血清培養(yǎng)液培養(yǎng)第3代傳代NPMSCs，72h后利用CCK一8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖，并采用RT—PCR檢測(cè)細(xì)胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、SOX9的mRNA表達(dá)，借助流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)
3、行細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。結(jié)果①大鼠NPMSCs的成骨、成軟骨能力強(qiáng)，成脂能力較差，且其細(xì)胞表面高度表達(dá)CD29、CD90、CD105，低度表達(dá)CD24、CD34，細(xì)胞基因Sox2、Nanog高度表達(dá)。②隨著培養(yǎng)液血清體積濃度增加，OD值增大，NPM．SCs的凋亡率降低，細(xì)胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、SOX9基因的mRNA表達(dá)增加。結(jié)論①大鼠NPMSCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性；②細(xì)胞外營養(yǎng)影響大鼠NPMSCs的增殖、分泌、凋亡?！娟P(guān)鍵詞】椎間盤退變髓核間充質(zhì)干細(xì)胞營養(yǎng)增殖凋亡Efectonbiologicalcharac
4、teristicsofratnucleuspulposusmesenchymalstemcellunderdiferentconcentrationfetalbovineserulnngLiang，ZhangⅣ，GuanXiaoming，eta1．ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheoptimumvolumeconcentrationofse131mforthecultureoftheratnucl
5、eusmes—enchymalstemcells(NPMSCs)invitroandthemechanismofintervertebraldiscdegeneration．MethodsNPMSCswasiso-latedandcuhuredfromthelumbarandcaudaloftheSDratsbyCollagenase，trypsinsequentialdigestionmethod，andthentheywereculturedsubcuhuredinvitro．①Flowcytomet
6、rywasusedtoidenti~thecellphenotypeCD29，CD34，CD24，CD90，CD105ofthethirdgenerationNPMSCs．②TheexpressionofSox2，NanogwereassessedbyPCR．(ThethirdgenerationNPMSCswereinducedandculturedbyosteogenesis，chondroblastomasandlipoblastcultureinincubatortll37℃，21％O2，5％CO
7、2condition．After2weeks，dyedthemandobservedtheabilityofosteoporosis，chondroblastomasandlipoblast．④Culturedthethirdgenera—tionNPMSCswithdiferentvolumeconcentrationsoftheDMEM-F12serum(0％，5％，10％，20％，30％)underconditionof37~C，21％02，5％C02for72hours．Thecellprolif
8、erationwasdetectedbyCCK-8methodindiferentgroups，andtheproteogly-canexpressionofthemRNAofSOX9，collagenII，wereassessedbyRT-PCR，andfloweytometrywasusedtodetectapoptosis．Results④TheosteogenicandcartilageabilityoftheratN
