資源描述:
《時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)培訓(xùn)》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、時(shí)間分辨熒光技術(shù)廣州市源起生物科技有限公司培 訓(xùn)主要內(nèi)容時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)(TRF)定義。TRF的標(biāo)記物及特點(diǎn)。為什么叫“時(shí)間分辨”?TRF在免疫分析方法學(xué)中的地位。各種免疫方法學(xué)的比較。臨床應(yīng)用回顧標(biāo)記免疫學(xué)發(fā)展放射免疫(精度:10-12mol/L)酶聯(lián)免疫(精度:10-9mol/L)膠體金標(biāo)記(金標(biāo):10-15mol/L)化學(xué)發(fā)光(精度:10-15mol/L)電化學(xué)發(fā)光(精度:10-17mol/L)時(shí)間分辨熒光(精度:10-18mol/L)生物芯片時(shí)間分辨熒光技術(shù)(Time-ResolvedFluorescence)時(shí)間分辨熒光免疫
2、分析(TRFIA)時(shí)間分辨免疫熒光分析(TRIFMA)時(shí)間分辨熒光核酸探針分析時(shí)間分辨熒光細(xì)胞活性分析時(shí)間分辨熒光探針分析時(shí)間分辨熒光技術(shù)原理(TRF)用三價(jià)稀土離子及其螯合物作為示蹤物,代替熒光物質(zhì)、同位素、酶和化學(xué)發(fā)光物質(zhì),標(biāo)記抗原、抗體、激素、核酸探針等物質(zhì);當(dāng)免疫反應(yīng)發(fā)生后,根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的特點(diǎn)(特異性強(qiáng)、熒光光譜的Stokes位移、壽命長(zhǎng)),用時(shí)間分辨熒光分析儀,測(cè)定免疫反應(yīng)最后產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度。根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對(duì)熒光強(qiáng)度比值,判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度,達(dá)到定量分析的目的。時(shí)間分辨熒光免疫原理圖(Time-resolv
3、edFluorescenceImmunoassay)時(shí)間分辨熒光免疫試劑工作原理示意圖微量反應(yīng)孔包被好的表面抗體表面抗原V標(biāo)記物輕鏈螯合劑Eu重鏈VV標(biāo)記物為具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘南⊥两饘?--鑭系元素鑭系元素共有15種,應(yīng)用在時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)中有四種:銪(Eu)、釤(Sm)、鏑(Dy)、锝(Te)鑭系元素?zé)晒馓攸c(diǎn):熒光壽命極長(zhǎng)鑭系元素螯合物(60~900us)<銪:714us>普通熒光免疫中熒光團(tuán):1~100us樣本中蛋白質(zhì)熒光:1~10us,易猝滅。Stokes位移大(大約290nm)銪:發(fā)射光613nm、激發(fā)光340nm,熒光素的St
4、okes位移為28nm熒光特異性強(qiáng)。(發(fā)射光譜帶很窄:615±5nm)解離-增強(qiáng)技術(shù)可使其熒光性提高100萬倍利用鑭系元素?zé)晒馕锢硖匦?,熒光激發(fā)后在固定時(shí)間段檢測(cè)特異性熒光而在此時(shí)間之前,非特異性熒光已完全衰減為0時(shí)間分辨熒光免疫原理圖利用鑭系元素光譜特點(diǎn),將發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分辨開來,零本底的又一保障發(fā)射光譜與激發(fā)光譜間存在的巨大Stokes位移??梢酝ㄟ^干涉濾光片將發(fā)射光譜與激發(fā)光譜完全分離。DELFIA技術(shù)為臨床檢測(cè)帶來的先進(jìn)性技術(shù)特點(diǎn)檢驗(yàn)先進(jìn)性時(shí)間分辨光譜分辨特異性熒光與非特異性熒光分離發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離零背景、高特異性解離-增強(qiáng)
5、熒光性大大提高穩(wěn)定的熒光螯合物線性范圍更寬重復(fù)性更好原子標(biāo)記標(biāo)記位點(diǎn)多,可達(dá)20個(gè)對(duì)標(biāo)記物結(jié)構(gòu)及活性影響小無衰變受環(huán)境影響小高穩(wěn)定性,高精確度試劑保質(zhì)期至少一年標(biāo)準(zhǔn)曲線保留時(shí)間長(zhǎng)同一批次只需兩點(diǎn)定標(biāo)多標(biāo)記單,雙,三,四標(biāo)記同一試劑盒可同時(shí)測(cè)多個(gè)項(xiàng)目靈敏度更高,檢測(cè)范圍更廣以下數(shù)據(jù)均出自于各制造廠家自己的產(chǎn)品說明書試劑DELFIAImmuliteACS-180AFP0.1-1000IU/ml0.2-300IU/ml1.0-1000IU/mlCEA0.1-500ng/ml0.2-500ng/ml0.5-100ng/mlHCG0.5-10000U/
6、L5-5000U/L2-1000U/LTSH0.005-100μU/ml0.002-75μU/ml0.03-150μU/mlFSH0.05-256mU/ml0.1-170mU/ml0.3-200mU/mlProg0.08-120nmol/L無0.1-40ng/mlProlactin0.04-250ng/ml0.5-150ng/ml0.3-200ng/ml時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定,同一批次的試劑盒可用兩點(diǎn)法加批次的參考曲線定標(biāo)0.5125102050100200500U/L51002000Cps.103DELFIAhFSHN=6標(biāo)
7、準(zhǔn)曲線穩(wěn)定,試劑保質(zhì)期時(shí)間長(zhǎng)放射性免疫分析法(RIA)應(yīng)用放免自60年代問世以來對(duì)臨床診斷起了革命性的貢獻(xiàn),是一項(xiàng)較為成熟的診斷技術(shù)。夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法的標(biāo)記原理為以后的檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。缺點(diǎn)放射性(125I),對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)身體的危害,該方法已經(jīng)為重視環(huán)保的國(guó)家逐步取消。(如整個(gè)歐洲僅尚存幾個(gè)放免試驗(yàn)室)125I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。標(biāo)記物125I的穩(wěn)定性差,導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大;標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短,必須每次定標(biāo),造成浪費(fèi)。操作繁瑣,出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)。無法保存?zhèn)溆谩C该庖叻治龇ǎ‥LISA)應(yīng)用酶免的最大優(yōu)勢(shì)在于避免了對(duì)
8、環(huán)境和人體危害。試劑有效期較長(zhǎng)。衍生技術(shù):熒光酶免疫分析增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)曾經(jīng)一度被認(rèn)為是取代放免的檢測(cè)手段。缺點(diǎn)靈敏度、重復(fù)性不及放免,易造成漏檢和假陽性。因