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《乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?操作說(shuō)明.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃保存12個(gè)月。探針若單獨(dú)儲(chǔ)存，應(yīng)注意避光。（PCR-熒光探針?lè)ǎ┎僮髡f(shuō)明【適用儀器】【產(chǎn)品名稱】本品適用于AB7300/7500/Mx3000P/LightCycler480/SLAN實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。通用名稱：乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?【樣本要求】英文名稱：DiagnosticKitforQuantificationofHepatitisBVirusDNA(PCR-FluorescenceProbing)用一次性的針筒抽取病人靜脈血1ml，置于滅菌的一次性試管中室溫自
2、然凝固或800～1600g離心20分鐘，取分離出的【包裝規(guī)格】血清0.2ml左右送檢。血清標(biāo)本2～8℃可放置72小時(shí)，-70℃可長(zhǎng)期保存，標(biāo)本不宜反復(fù)凍融。32人份/盒【檢驗(yàn)方法】【預(yù)期用途】1.試劑配制乙型肝炎病毒是乙型病毒性肝炎的病原體，具有較強(qiáng)傳染性，傳播途徑復(fù)雜，流行面廣，發(fā)病率高等特點(diǎn)，可導(dǎo)按樣本數(shù)（樣本數(shù)＝待檢血清樣本數(shù)＋血清對(duì)照品3個(gè)＋定量校準(zhǔn)品5個(gè)）n配制反應(yīng)液：致急慢性乙型肝炎，淤膽型肝炎，嚴(yán)重的可導(dǎo)致急性肝衰竭，臨床上主要表現(xiàn)為肝功能損害，部分患者可有黃疸。隱形感取PCR緩沖液An×15μl、HBV引物探針n×10μl、Taq酶n×5μ
3、l、MgCl2n×13μl至于一離心管中混勻；低速離染較為常見(jiàn)。心數(shù)秒，按43μl/管分裝到反應(yīng)管中。目前臨床上常用的HBV檢測(cè)方法主要有酶免疫法、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBV標(biāo)志物和核酸檢測(cè)HBVDNA方法。本試劑2.內(nèi)參配制盒定量檢測(cè)人血清和血漿樣本中的乙型肝炎病毒DNA，主要是通過(guò)對(duì)乙肝患者血中HBVDNA基線水平和變化情況的監(jiān)測(cè)，用于評(píng)估抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果監(jiān)測(cè)。檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不能作為患者病情單獨(dú)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，必須結(jié)合臨床將n×3μl內(nèi)參（單通道儀器不加內(nèi)參）及n×50μl核酸提取液B至于一新離心管中混勻備用（混合后避免反復(fù)凍融表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室
4、檢測(cè)指標(biāo)對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)價(jià)，亦不能作為血液篩查HBV病毒的篩查試劑使用。使用，使用前混勻5秒鐘）?！緳z驗(yàn)原理】3.樣本、對(duì)照品的處理本品基于TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)。在PCR反應(yīng)過(guò)程中，同時(shí)利用Taq酶的5’→3’聚合酶活性和核酸外樣本處理：取100μl待檢血清樣本（凍存血清使用前在室溫融解，振蕩混勻10秒鐘）分別加入100μl核酸提取液A，切酶活性，使得TaqMan探針降解，熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離使得熒光信號(hào)發(fā)射，F(xiàn)AM熒光檢測(cè)乙型肝炎病毒，JOE/RED振蕩混勻10秒種，12?000rpm離心10分鐘，棄上清；分別加入50μl核酸提取液B
5、與內(nèi)參的混合液至沉淀中（使用前一定610nm波長(zhǎng)通道檢測(cè)內(nèi)參。要充分混勻，將顆粒和液體一起加入沉淀中，其中顆粒量應(yīng)在15％以內(nèi)），振蕩混勻10秒鐘，100℃保溫10分鐘，12?000rpm本品使用外源性內(nèi)參，可以監(jiān)控和避免由于樣本中的PCR抑制物或操作不當(dāng)引起的“假陰性”結(jié)果?！局饕M成成份】離心2分鐘。處理后的樣品應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用，或在-20℃～-80℃最長(zhǎng)保存1個(gè)月（不宜反復(fù)凍融）。每個(gè)反應(yīng)組份名稱裝量主要成份血清對(duì)照品處理：按照血清標(biāo)本處理方法處理試劑盒內(nèi)陽(yáng)性血清對(duì)照、弱陽(yáng)性血清對(duì)照、陰性對(duì)照。（凍存血清對(duì)照品中的用量使用前在室溫融解，振蕩混勻10秒
6、鐘）。1核酸提取液A3×1.1ml/管100μl聚乙二醇、NaCl定量校準(zhǔn)品處理：定量校準(zhǔn)品無(wú)需處理，在樣本加樣前直接將定量校準(zhǔn)品1號(hào)至5號(hào)振蕩混勻10秒鐘，低速離心數(shù)秒NaOH、SDS、Tween-20、2核酸提取液B2×1ml/管50μlChelex-100后加樣。3內(nèi)參160μl/管3μl合成病毒4.樣本加樣4MgCl2450μl/管13μlMgCl2將樣品處理上清液（凍存樣品使用前室溫充分融化，振蕩混勻數(shù)秒，12,000rpm離心2分鐘）、陽(yáng)性血清對(duì)照、弱陽(yáng)性血清對(duì)照、陰性對(duì)照以及定量校準(zhǔn)品各7μl分別加入反應(yīng)管中，低速離心數(shù)秒，取出置定量PCR儀
7、上。5PCR緩沖液A480μl/管15μlBuffer、dNTPs5.儀器擴(kuò)增程序6Taq酶160μl/管5μlTaq酶、UNG酶1、ABI7300/7500/Mx3000P/SLAN雙通道儀器：反應(yīng)管先在50℃反應(yīng)2分鐘，然后94℃保溫5分鐘，再按94℃10秒→60℃45HBV引物和探針，內(nèi)參7HBV引物探針320μl/管10μl引物和探針秒循環(huán)40次。60℃采集FAM、JOE熒光通道的信號(hào)。8陰性對(duì)照100μl/管－HBV陰性血清2、LightCycler480儀器：反應(yīng)管先在50℃反應(yīng)2分鐘，然后94℃保溫5分鐘，再按94℃10秒→60℃45秒循環(huán)4
8、0次。9陽(yáng)性血清對(duì)照100μl/管－HBV陽(yáng)性血清60℃采集FAM
