大腸桿菌o104核酸擴增(pcr-熒光探針法)試劑盒說明書

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1、天津生物芯片技術有限責任公司大腸桿菌O104核酸擴增（PCR-熒光探針法）檢測試劑盒說明書Cat.No.FP017大腸桿菌O104核酸擴增（PCR-熒光探針法）檢測試劑盒【產(chǎn)品名稱】中文名稱：大腸桿菌O104核酸擴增（PCR-熒光探針法）檢測試劑盒英文名稱：RealTimePCRdiagnostickitforEscherichia?coliO104【包裝規(guī)格】20次/盒【預期用途】用于臨床樣品以及環(huán)境樣品中的大腸桿菌O104的檢測?！緳z測原理】試劑盒采用taqman熒光探針的技術，在反應過程中大腸桿菌O

2、104特異的熒光探針跟靶核酸雜交,同時被Taq酶水解,把探針上的熒光基團和淬滅基團分開,從而通過熒光增量來實時判斷大腸桿菌O104的存在。【產(chǎn)品組成】大腸桿菌O104核酸擴增（PCR-熒光探針法）檢測試劑盒組份規(guī)格數(shù)量核酸提取液1ml/支3支大腸桿菌O104熒光PCR反應液160μl/支1支Taq酶12μl/支1支大腸桿菌O104陽性對照品100μl/支1支陰性對照品100μl/支1支DEPCH2O1ml/支1支【適用的RealTimePCR擴增儀】ABI、Roche、MJ、Bio-rad、Eppendo

3、rf等多種全自動熒光定量PCR檢測儀【實驗操作】1．基因組提取（1）取培養(yǎng)后的菌液約1.5ml，12000rpm離心2min，棄上清。（2）加入200μl無菌水，充分混勻，12000rpm離心2min，棄上清。（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混勻，50℃水浴1小時，100℃水浴15分鐘，冰上放置10分鐘后12000rpm離心3min。（4）取上清液用于PCR檢測。2．熒光定量PCR檢測（1）按下列組份配制反應液（反應液配制請在冰上進行）大腸桿菌O104熒光PCR反應液：7.4μlTaq酶：0.3μl

4、樣品DNA或陰陽性對照品：5μlDEPCH2O：12.3μl（2）PCR擴增95℃2min40Cycles95℃15sec60℃1min熒光檢測在60℃，反應體系為25μl，熒光通道選用FAM通道?！窘Y果判讀】1．基線的設定（1）對于ABI系列儀器，分析前把參比熒光定為none，如果沒有Ct<16第2頁網(wǎng)址：http://www.tjbiochip.com/index.jsp電話：022-66229538天津生物芯片技術有限責任公司大腸桿菌O104核酸擴增（PCR-熒光探針法）檢測試劑盒說明書Cat.No

5、.FP017的強陽性標本，就選3-15個循環(huán)的平均熒光信號為基線分析；如果有Ct<16的強陽性標本，就將此標本定為AFUMIDNA>1010copy/ml，并將此樣品從數(shù)據(jù)庫中剔除，再以3-15個循環(huán)的平均熒光信號為基線再分析Ct。（1）對于iCycler儀器，基線一般按照自設值（2-10）即可，在實驗結束后，選擇PCRbaselinesubstract選項扣除基線值。若某些曲線出現(xiàn)了規(guī)則的劇烈的跳動，應視為非正常情況，將其從結果中剔除（擊活selectwells,將此孔彩色點去，然后選擇displayw

6、ells）并注意調(diào)整坐標，使所有曲線都在坐標以內(nèi)。（2）對于lightcycler儀器，用熒光記數(shù)值F1/F2讀取結果?；€設定原則以超過正常陰性對照擴增曲線的最高點，且Ct值不出現(xiàn)任何數(shù)值為準（一般在0.001-0.05范圍內(nèi)）。2．閾值的設定應在擴增曲線的指數(shù)增長期內(nèi)且高于陰性對照品的擴增曲線最高點，推薦將閾值設定在指數(shù)增長期和線性期的拐點處。3．結果分析Ct值無任何數(shù)值陰性結果38≤Ct值<40（重新檢測2次）復檢2次，Ct值無，陰性結果復檢2次，其中至少1次Ct值<40，陽性結果Ct值<38陽性結

7、果【注意事項】1.實驗前請仔細閱讀本說明書。2.本試劑盒不做臨床診斷。3.實驗室管理應嚴格按照PCR基因擴增實驗室的管理規(guī)范，試驗人員必須進行專業(yè)培訓，實驗過程中嚴格分區(qū)進行（試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)），實驗操作的每個階段使用專用的儀器和設備，各區(qū)用品不能交叉使用。4.對每次實驗進行質(zhì)量控制。5.試劑使用前要完全解凍，并混合均勻，但應避免反復凍融，探針應避光保存。6.所有檢測樣品應視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》和《醫(yī)療廢物

8、管理條例》。【保存條件】1．本試劑盒于-20℃保存。2．PCR反應液應避免反復凍融。【有效期】有效期為6個月。【生產(chǎn)企業(yè)】天津生物芯片技術有限責任公司地址：天津經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)宏達街23號一區(qū)郵編：300457網(wǎng)址：http://www.tjbiochip.com電話：（022）66229538傳真：（022）66229596第2頁網(wǎng)址：http://www.tjbiochip.com/index.jsp電話：022-66229