一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒及其方法-授權(quán).pdf

《一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒及其方法-授權(quán).pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、(19)中華人民共和國(guó)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局*CN102417936B*(12)發(fā)明專利(10)授權(quán)公告號(hào)(10)授權(quán)公告號(hào)CN102417936BCN102417936B(45)授權(quán)公告日2013.09.18(21)申請(qǐng)?zhí)?01110417476.1CN101158634A,2008.04.09,胡瑞波等.植物實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因(22)申請(qǐng)日2011.12.13的選擇.《中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)》.2009,30-36.(73)專利權(quán)人泰普生物科學(xué)（中國(guó)）有限公司韓佳琪等.慢性乙肝患者石蠟包埋肝組織中地址350002福建省福州市金山工業(yè)區(qū)金洲HBVcccDNA定量檢測(cè)方法的建立.《解放軍醫(yī)學(xué)

2、北路7號(hào)二期7號(hào)標(biāo)準(zhǔn)廠房四層雜志》.2011,(72)發(fā)明人何東華黃發(fā)平審查員徐俊(74)專利代理機(jī)構(gòu)福州市鼓樓區(qū)博深專利代理事務(wù)所(普通合伙)35214代理人林志崢(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)G01N21/64(2006.01)(56)對(duì)比文件WO2006001972A2,2006.01.05,CN101158634A,2008.04.09,權(quán)利要求書1頁(yè)說(shuō)明書14頁(yè)權(quán)利要求書1頁(yè)說(shuō)明書14頁(yè)序列表4頁(yè)附圖6頁(yè)序列表4頁(yè)附圖6頁(yè)(54)發(fā)明名稱一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒及其方法(57)摘要本發(fā)明涉及一種疾病病

3、原體基因檢測(cè)技術(shù)，尤其涉及適用于定量檢測(cè)血清或血漿樣品中乙型肝炎病毒(HBV)的定量檢測(cè)。本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒，包括PCR反應(yīng)液，所述PCR反應(yīng)液含有引物A和熒光探針A；所述引物A分為上游引物A和下游引物A，所述試劑盒還包括DNA聚合酶、UNG酶、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品、弱陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性定量參比品、DNA提取液。本發(fā)明的熒光PCR定量檢測(cè)試劑盒和方法，利用了Taqman核心技術(shù)平臺(tái)和擬南芥內(nèi)參照系統(tǒng)，檢測(cè)的靈敏度更高。并且準(zhǔn)確性、特異性、重復(fù)性、穩(wěn)定性、靈敏度和精密度相對(duì)現(xiàn)有產(chǎn)品有了提高。CN102417936BCN102417936BCN

4、102417936B權(quán)利要求書1/1頁(yè)1.一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒，包括PCR反應(yīng)液，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液含有引物A和熒光探針A；所述引物分為上游引物A和下游引物A:上游引物A：5’-TCTTCTTGTTGGTTCTTCTGGACT-3’；下游引物A：5’-AAACATAGAGGTTCCTTGAGCAGG-3’；熒光探針A：5’-CAAGGTATGTTGCCCGTTTGTCCTCTA-3’；所述試劑盒還包括DNA提取液、DNA聚合酶、UNG酶、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品、弱陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性定量參比品；所述PCR反應(yīng)液引入了一個(gè)人工構(gòu)建的內(nèi)參照系統(tǒng)用于避免檢測(cè)結(jié)果假

5、陰性，所述內(nèi)參照系統(tǒng)為擬南芥內(nèi)參照系統(tǒng)，所述內(nèi)參照系統(tǒng)包括上游引物B序列如：SEQIDNO.4、下游引物B序列如：SEQIDNO.5和熒光探針B序列如：SEQIDNO.6。2CN102417936B說(shuō)明書1/14頁(yè)一種乙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒及其方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及一種疾病病原體基因檢測(cè)技術(shù)，尤其涉及適用于定量檢測(cè)血清或血漿樣品中乙型肝炎病毒(HBV)PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒及其方法。背景技術(shù)[0002]乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)是嚴(yán)重危害人類健康的肝炎病毒之一，是重要的肝臟疾病致病因子。世界上有20億人感染過(guò)HBV，目前全世界慢性

6、HBV感染患者至少有3.8億，其中慢性HBV攜帶者75％分布在東南亞和次撒哈拉地區(qū)，而我國(guó)就占了1.4億，其中有2000萬(wàn)人為慢性乙肝患者，每年因此病死亡的人有近50萬(wàn)。估計(jì)全球每年有100-200萬(wàn)人直接死于HBV持續(xù)感染。[0003]HBV屬于嗜肝DNA病毒科，是一種DNA病毒，其基因組由長(zhǎng)3.2kb的部分雙鏈DNA組成，共有四個(gè)開放讀碼框(OpenReadingFrame，ORF)：S、C、P、X，他們編碼至少8個(gè)不同蛋白：表面抗原蛋白，DNA多聚酶蛋白，核心抗原蛋白，X蛋白等。HBV具有病毒復(fù)制產(chǎn)量高(1012-13病毒粒/天)和突變率高(1010-11個(gè)點(diǎn)突變/天)的特征，高

7、突變是由于高復(fù)制，尤其是由于基因組復(fù)制，需先轉(zhuǎn)錄為RNA中間體，但聚合酶缺乏校正功能所致。根據(jù)HBV全基因核苷酸序列異源性大于8％或S基因區(qū)核苷酸序列異源性大于4.1％，可將HBV分為A、B、C、D、E、F、G、H8個(gè)基因型。[0004]相關(guān)的臨床及實(shí)驗(yàn)室診斷方法：[0005]實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的技術(shù)手段較多，其中最常采用酶免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物(HBV-M)，它具有快速、價(jià)廉、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，可用于乙肝的大批量