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1、黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)２０１４（７）：１１９～１２２ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ橘皮果膠酶高產(chǎn)菌株的篩選與產(chǎn)酶條件的優(yōu)化羅群１，李路娥２（１．成都師范學(xué)院，四川成都６１１１３０；２．東莞市第六高級中學(xué)，廣東東莞５２３４００）摘要：為合理利用橘皮進行工業(yè)化提取果膠酶，采用平板分離法進行果膠酶高產(chǎn)菌株的篩選與產(chǎn)酶條件的優(yōu)化。結(jié)果表明：經(jīng)過初篩和復(fù)篩分離得到１株果膠酶的高產(chǎn)菌株，根據(jù)形態(tài)特征觀察初步鑒定其為黑曲霉。其固態(tài)發(fā)酵最優(yōu)產(chǎn)酶條件為：橘皮粉０．５ｇ，硫酸銨０．２０ｇ，麩皮１０ｇ，水１０ｍＬ，２８℃培
2、養(yǎng)３ｄ，在此條件下，該菌株的酶活力可達到１４４７．８６Ｕ·ｍＬ－１。關(guān)鍵詞：果膠酶；高產(chǎn)菌；篩選；優(yōu)化中圖分類號：Ｑ９４６．５；Ｑ９３－３３１文獻標(biāo)識碼：Ａ文章編號：１００２－２７６７（２０１４）０７－０１１９－０４果膠酶（ｐｅｃｔｉｎａｓｅ），又稱多聚半乳糖醛酸酶，果蒂后備用。橘皮粉為橘子皮高溫干燥后粉碎，是水解組成果膠的Ｄ－聚半乳糖醛酸α－（１，４）糖苷過４０目篩后備用。鍵的酶。果膠酶在食品工業(yè)方面主要應(yīng)用于果汁供試培養(yǎng)基（１）增殖培養(yǎng)基：土豆１００ｇ，蔗糖［１－４］，其廣泛存－１，ｐＨ自然。（２）初提取、果膠澄清和植物纖
3、維分解等１０ｇ，水５００ｇ，瓊脂１５．０ｇ·Ｌ在于動植物和微生物中，但動植物來源的果膠酶篩培養(yǎng)基：粗果膠１０．０ｇ·Ｌ－１，牛肉膏２．５ｇ·Ｌ－１，產(chǎn)量低，難于大規(guī)模地提取制備。近年來，隨著我蛋白胨１０．０ｇ·Ｌ－１，ＮａＣｌ為５．０ｇ·Ｌ－１，Ｋ２ＨＰＯ４國果汁飲料行業(yè)的快速發(fā)展，對果膠酶的需求日１．０ｇ·Ｌ－１，ＫＨ·Ｌ－１，瓊脂１５．０ｇ·Ｌ－１，２ＰＯ４０．３ｇ益增長，果膠酶制劑的產(chǎn)量呈現(xiàn)供不應(yīng)求的現(xiàn)狀。ｐＨ６．０。（３）對照培養(yǎng)基：牛肉膏２．５ｇ·Ｌ－１，蛋白柑橘是世界產(chǎn)量第一的水果，也是我國第二胨１０．０ｇ·Ｌ－１
4、，ＮａＣｌ５．０ｇ·Ｌ－１，Ｋ２ＨＰＯ４［５］大水果，橘子在加工生產(chǎn)橘子汁或生鮮食用時，－１，ＫＨ·Ｌ－１，瓊脂１５．０ｇ·Ｌ－１，１．０ｇ·Ｌ２ＰＯ４０．３ｇ約產(chǎn)生４０％～５０％的皮渣，橘子皮除極少數(shù)用來－１，ｐＨ６．０。（４）選擇培養(yǎng)基：Ｋ２ＨＰＯ４１．０ｇ·Ｌ制作陳皮這一中成藥外，幾乎９８％的橘子皮都被ＭｇＳＯ４０．５ｇ·Ｌ－１，ＮａＮＯ３３．０ｇ·Ｌ－１，ＦｅＳＯ４作為廢料丟棄了，既造成了資源的浪費，也造成了０．０１ｇ·Ｌ－１，純果膠２．０ｇ·Ｌ－１，瓊脂１５．０ｇ·Ｌ－１，環(huán)境的污染。橘子皮中含有大量的果膠成分，約ｐ
5、Ｈ６．０。（５）固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮１０ｇ，橘皮粉２０％～３０％，可作為食品級的果膠增稠劑與穩(wěn)０．２ｇ，硫酸銨０．３ｇ，水１０ｍＬ，ｐＨ自然。定劑。１．２方法研究從腐爛的橘皮中分離篩選能夠分解果膠１．２．１果膠的提取制備稱取新鮮橘皮５０ｇ置的菌株，通過富集培養(yǎng)結(jié)合剛果紅平板水解圈法，于大燒杯中，加入５００ｍＬ清水５５℃水?。常埃恚椋?，初步篩選到多株有果膠分解能力的菌株，通過液沸水浴滅酶５ｍｉｎ。取出后將橘皮冷卻，切成直體搖瓶復(fù)篩，測定菌株的酶活，從中獲得１株高產(chǎn)徑為０．５ｃｍ左右的小塊，蒸餾水沖洗２次，紗布果膠酶的果膠分解菌株
6、，對其進行形態(tài)特征觀察，瀝干。將處理后的橘皮置于大燒杯中，加入并研究菌株液體發(fā)酵產(chǎn)酶條件，為合理利用橘皮ｐＨ２．０的鹽酸溶液２００ｍＬ，７５℃水?。叮埃恚椋?，并及其工業(yè)化提取果膠酶奠定了基礎(chǔ)。不斷攪拌。四層紗布過濾，待濾液冷卻后向其中１材料與方法加入１５０ｍＬ的９５％乙醇有絮狀沉淀產(chǎn)生。將其１．１材料靜置３０ｍｉｎ后用４層紗布過濾，取沉淀烘干，得供試橘子皮為市購柑橘手工剝皮所得，剔除到粗果膠產(chǎn)物，并將其用于之后的菌株培養(yǎng)。１．２．２菌株的篩選菌株的篩選分４個步驟。（１）采樣：將新鮮橘皮置于潮濕環(huán)境中密封保收稿日期：２０１４－０
7、３－０５基金項目：四川省教育廳資助項目（１１ＺＢ０７６）存，７～１４ｄ后將已發(fā)霉生菌的橘皮置于三角瓶第一作者簡介：羅群（１９７９－），女，四川省宜賓市人，碩士，講師，中，加適量無菌水置于搖床中，１２０ｒ·ｍｉｎ－１振蕩從事生物學(xué)及預(yù)防醫(yī)學(xué)研究。Ｅ－ｍａｉｌ：３７２３８４６６４＠ｑｑ．ｃｏｍ。３０ｍｉｎ，制成菌懸液備用。１１９黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)７期（２）富集培養(yǎng)：菌懸液經(jīng)梯度稀釋后，涂布到１．２．５酶活力測定先制備菌懸液，再進行酶活增殖培養(yǎng)基中，２８℃富集培養(yǎng)１～２ｄ。動測定。（３）初篩：將富集培養(yǎng)基中產(chǎn)生的菌落分別制（１）菌懸液的
8、制備：以增殖培養(yǎng)基制備固體斜備菌懸液，梯度稀釋后將每株菌懸液分別涂布到面，將待測菌株接種到斜面上，２８℃培養(yǎng)３ｄ，向試初篩培養(yǎng)基中，２８℃培養(yǎng)３ｄ后挑取長勢較好的管中加入１０ｍＬ無菌水，振蕩，制成菌懸液。移菌株進行復(fù)篩。取１ｍＬ菌懸液至固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，２８℃培養(yǎng)（４）復(fù)篩：
