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《黃芪注射液對(duì)雌激素受體的激活作用研究 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、黃芪注射液對(duì)雌激素受體的激活作用研究王海彬，王軍艦，黃輝，劉琳，劉少軍，徐傳毅，何偉，樊粵光，黃志偉【關(guān)鍵詞】黃芪注射液；,,基因報(bào)告系統(tǒng)；,,雌激素受體；,,HeLa細(xì)胞；,,配體結(jié)合域 摘要：目的構(gòu)建含有雌激素受體配體結(jié)合域的哺乳動(dòng)物細(xì)胞雜交基因報(bào)告系統(tǒng)，研究黃芪注射液對(duì)雌激素受體（ER）活性的影響。方法PCR擴(kuò)增雌激素受體配體結(jié)合域，將配體結(jié)合域克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pCMV-BD構(gòu)建細(xì)胞雜交基因報(bào)告系統(tǒng),研究黃芪注射液與雌激素受體的關(guān)系；MTT法檢測(cè)黃芪注射液對(duì)細(xì)胞活力的影響。結(jié)果成功構(gòu)建含有雌激素受體配體結(jié)合域的哺乳動(dòng)物細(xì)胞雜交基因報(bào)告系統(tǒng)，黃芪注射液不能提高細(xì)胞活性，但對(duì)雌激素
2、受體具有激活作用。結(jié)論黃芪注射液可能通過雌激素受體發(fā)揮療效，細(xì)胞雜交基因報(bào)告系統(tǒng)是研究中藥作用機(jī)理的手段之一?！ ￡P(guān)鍵詞：黃芪注射液；基因報(bào)告系統(tǒng)；雌激素受體；HeLa細(xì)胞；配體結(jié)合域 ActivatingEffectofAstragalusInjectiononEstrogenReceptor Abstract:ObjectiveToestablishtheGal4DBD-ERorERLBDreportsystemtostudytheeffectofAstragalusInjectiononERs.MethodsGenereportsystemplifyingtheligandbi
3、ndingdomain(LBD)eraseandsubcloningtheproductintotheeukaryoticexpressionvectorpCMVBD.ThissystemployedtostudytherelationshipbetusingER-LBDisestablished.AstragalusInjectioncannotimprovecellactivitybutcanactivateERsactivation.ConclusionThemechanismsofAstragalusInjectionmayberelatedtoitseffectofactiva
4、tingERs.GenereportsystemcanbeusedtostudythemechanismsofChinesetraditionalmedicine. Key；Estrogenreceptor；HeLacell；Ligandbindingdomain 雌激素受體（Estrogenreceptor,ER）是一個(gè)核轉(zhuǎn)錄因子,屬甾體激素受體家族成員，調(diào)控基因表達(dá)。ER在1967年被首次發(fā)現(xiàn)〔1〕，20多年來,它作為內(nèi)分泌治療的預(yù)測(cè)因子被廣泛應(yīng)用。1996年ERα首次從大鼠中克隆〔2〕，其后人和小鼠也相繼發(fā)現(xiàn)ERβ的表達(dá)〔3，4〕。ERα和ERβ的結(jié)構(gòu)、功能存在差異,在乳腺癌的
5、發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不同作用〔5〕。因而研究藥物對(duì)雌激素受體的作用，將有利于我們認(rèn)識(shí)藥物的作用機(jī)理。黃芪主要有補(bǔ)氣的作用,在臨床上主要治療以氣虛為主證的疾病，在處方中多以君藥出現(xiàn),具有補(bǔ)中益氣、補(bǔ)氣升陽、益衛(wèi)固表的作用。為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，本研究采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞雜交技術(shù)研究黃芪注射液對(duì)雌激素受體配體結(jié)合域的作用，探討黃芪對(duì)雌激素受體的部分作用?！ ?材料與方法 1.1材料Hela細(xì)胞由中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院裴端卿研究員贈(zèng)送；DMEM無血清、無酚紅培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素和鏈霉素購自Hyclone公司；Lipofactemine2000購自Invitrogen公司；Stead
6、yGlo熒光檢測(cè)試劑盒購自Promega公司；細(xì)胞培養(yǎng)板均購自CorningCostar公司；MTT購自Molecular公司；黃芪注射液(上海禾豐藥業(yè))?！ ?.2PCR擴(kuò)增hERa-LBDcDNA 根據(jù)genebank報(bào)道的ERs序列（M12674和NM001437），設(shè)計(jì)hERa-LBD和hERb-LBDcDNA序列的引物,在5’端引入一個(gè)BamHⅠ的酶切位點(diǎn),在hERa-LBD的3’端引入一個(gè)EcoRⅠ的酶切位點(diǎn)，在hERb-LBD的3’端引入一個(gè)HindⅢ的酶切位點(diǎn)，引物序列如下。上游5’GCGGATCCGGAGGGAGAATGTTGAAAC3’下游 5’GCGAATTCTC
7、AGACTGTGGCAGGGAAAC3’；HumanERβLBD引物序列：上游5’GCGGATCCGGCAAGGCCAAGAGAAGTG3’下游5’ GCAAGCTTTCACTGAGACTGTGGGTTC3’。以cmxp-ERa和cmxp-ERb全長cDNA質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃,5min；94℃，1min；55℃，1min；72℃，2min；72℃，7min循環(huán)20次；PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,用瓊脂
