鼠抗人ctni單克隆抗體fab段基因克隆和序列分析的論文

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1、鼠抗人cTnI單克隆抗體Fab段基因克隆和序列分析的論文作者：李妍妍，楊笛，卞智萍，徐晉丹，陳相健，顧春榮，張寄南【摘要】目的：克隆鼠抗人ctnimabfab段基因并進行序列分析.方法：設(shè)計擴增鼠igg重鏈fd段及κ輕鏈引物，從分泌ctnimab的雜交瘤細胞中提取總rna，rtpcr擴增，對擴增產(chǎn)物進行分子克隆、測序及序列分析.結(jié)果：重鏈和輕鏈引物分別擴增出一約700bp和800bpdna片段.經(jīng)序列分析，與已發(fā)表的鼠igg基因序列對比，其核苷酸及其所推導(dǎo)的氨基酸序列符合鼠igg1fab段特征.在genbank登錄，登錄號為ay

2、484430（重鏈）,ay484431（輕鏈）;氨基酸序列登錄號為aar83243（重鏈）,aar83244（輕鏈）.結(jié)論：本實驗室獲得了完整的鼠源性抗人ctnimabfab段基因，為鼠抗人ctni的人源化改造奠定了基礎(chǔ).【關(guān)鍵詞】抗體，單克隆；基因；序列分析；血清心肌鈣蛋白　　【abstract】aim:toobtainthegeneofmurineantictnifabfragmentandanalysethenucleotideanddeducedaminoacidsequences.methods:byrtpcrmet

3、hod,thecdnaofantictnimurineantibodyfabfragmentplifiedfromthehybridomacells.cloningandsubsequentsequenceanalysisofthefabfragmented.thededucedaminoacidsequenceate700and800basepairsplifiedusingiggheavychainprimersandκlightchainprimers,respectively.sequenceanalysisindica

4、tedthatthededucedaminoacidsequencesinoacidpresentinthemurineigg1fabfragment(genbankaccessionnoay484430,ay484431;proteinbankaccessionnoaar83243,aar83244).conclusion:thecloningandsequencingofapletemurineantictnifabfragmentprovidesabasisfortheproductionofthechimericanti

5、ctniantibody.　　【keyonocolonal;genes;sequenceanalysis;cardiactroponini　　0引言　　本室已有多株高特異高表達的鼠源性抗人ctni細胞株，用來檢測心肌損傷時外周血中ctni水平高低，顯示了較高的臨床診斷價值［1-4］.但由于鼠源性mab的人抗鼠抗體反應(yīng)［5］，使之不能用于體內(nèi)診斷及作為治療心肌損傷的藥物載體，所以必須對其進行人源化修飾，有關(guān)鼠源性抗人ctni的人源化改造少見報道.本研究目的是將鼠源性抗ctni抗體fab段基因克隆出來并進行序列分析，為下一步制備嵌合

6、抗體打下基礎(chǔ).　　1材料和方法　　1.1材料雜交瘤細胞株1株（js200202），大腸桿菌e.colidh5α由本室保存.pmd18t載體購自takara公司.taqdna聚合酶，amv逆轉(zhuǎn)錄酶（promega公司）；iptg(異丙基βd半乳糖苷)，xgal(5溴4氯3吲哚半乳糖苷)為上海生物工程公司產(chǎn)品.質(zhì)粒小量抽提試劑盒為上海華舜生物工程公司產(chǎn)品，g03sl離心式高純質(zhì)粒大量抽提試劑盒為上海申能博彩生物科技有限公司產(chǎn)品.　　1．2方法　　1．2．1pcr引物設(shè)計根據(jù)已發(fā)表的小鼠fab段的fd基因和輕鏈基因、f

7、r1和第一恒定區(qū)3′端的保守的基因序列，設(shè)計擴增fd基因和輕鏈基因的5′端和3′端引物.重鏈fd段5′端引物：h1:5′sakgtgcagctcgagsagtcaggacct3′；h2:5′gaggtycagctcgaacartctggacct3′；h3:5′caggtccaactcgagcagyctgggkct3′；h4:5′gaggttcagctcgagcagtctggrgcagctcgaggagtctggggga3′；輕鏈基因的5′端引物1：5′cctctagagacatccagatgamccagtctcc

8、3′；2：5′cctctagagacatyktgctgacycartctcc3′；3：5′cctctagaracattgtratgacmcartctcc3′；4：5′cctctagagacatycagmtgacycagtctcc3′；