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《極低頻率電磁場對離體腫瘤細胞的誘導凋亡作用論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、極低頻率電磁場對離體腫瘤細胞的誘導凋亡作用論文【摘要】目的探討極低頻率電磁場對體外培養(yǎng)腫瘤細胞的抑制作用。方法將人成骨肉瘤細胞（MG63）、乳腺癌細胞（MCF7）和肝癌細胞（HepG2）接種到96孔板中,并置于磁場強度分別為10mT、20mT、40mT、60mT的磁場中進行干預，每天刺激2次，每次1h，作用3天，同時每種細胞設置正常條件下的對照組。3天后以MTT法檢測細胞活性(OD值)，并采用流式細胞技術（AnnexinV—FITC和PI雙標）檢測3種細胞的凋亡情況。結果72h后以MTT法檢測3種細胞的OD值，并于正常對照組進行比較，SPSS軟件統(tǒng)計
2、結果顯示.freelT、20mT、40mT、60mT，刺激時間為每天2次，每次持續(xù)1h。3天后每孔加入MTT溶液20μl，繼續(xù)孵育4h后終止培養(yǎng)。小心吸棄上清液，每小孔加入DMSO150μl融解結晶物，振蕩10min后在酶標儀上測定各孔的吸光值。1.2.3流式細胞儀檢測各組3種腫瘤細胞凋亡的比例磁場強度及磁場作用的時間和方法同前。磁刺激停止后，胰酶消化細胞并調(diào)整細胞濃度為1×106個/ml。取1ml細胞1000r/min4℃離心10min，棄上清；加入1ml4℃的PBS輕輕振蕩使細胞懸浮，1000r/min4℃離心10min后棄上清，重復本步驟共3次
3、；將細胞懸浮于250μl的結合緩沖液中，取100μl的細胞懸液于5ml流式管中，加入5μlAnnexin－Ⅴ／FITC和10μlPI溶液，混勻后室溫避光孵育15min，在反應管中加入400μl的PBS后，流式細胞儀（FACS）檢測分析。每組取5樣本,每樣本計數(shù)1×106個細胞,并計算其陽性率。在480nm的激發(fā)光下，檢測3種腫瘤細胞凋亡細胞占細胞總數(shù)的比例。1.3統(tǒng)計學處理實驗結果以±s表示,采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，應用單因素方差分析進行統(tǒng)計學處理。2結果2.1各組腫瘤細胞生長形態(tài)觀察干預后至72h,磁場各組和對照組腫瘤細胞均有明顯的生長,正常
4、組細胞體積飽滿，細胞密集；磁場組細胞體積較正常組小,.freelT組），其中MG63和MCF7均在20mT出現(xiàn)最大抑制率（分別為34.82％、31.06％），而HepG2在60mT出現(xiàn)最大抑制率（19.69％）。經(jīng)SPSS軟件方差分析，各磁場組與對照組間差異有顯著性意義（P0.05），各磁場強度組間差異無顯著性意義(P0.05)。表1三種腫瘤細胞OD值注：與正常組比較，*標記：P0.05表2磁場對腫瘤細胞生長抑制率2.3流式細胞儀檢測結果對于流式細胞檢測，本實驗是基于MTT的結果上進行的，即在3種腫瘤細胞在MTT檢測上出現(xiàn)最大抑制率的磁場條件下進行的
5、流式細胞術分析。每個條件取5個樣本管，并設置正常條件下的對比組，見圖1～4，如在同一種條件下，其正常對照組的細胞凋亡率大于5％，則考慮有其他因素影響本實驗結果，這樣的樣本管放棄統(tǒng)計。其結果數(shù)據(jù)用±s表示，見表3。表3不同磁場強度對3種腫瘤細胞的抑制3討論國內(nèi)外許多學者研究了磁場對荷瘤動物的免疫力和離體腫瘤細胞的生物性狀影響1,2。其使用磁場類型和強度不同,所產(chǎn)生的生物學效應也不盡相同。并且,即使在相同的磁場條件下,不同的腫瘤細胞可產(chǎn)生不同的效果，我們在預實驗中發(fā)現(xiàn)50Hz的交變磁場對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞有抑制作用3。為進一步探討磁場對多種腫瘤細胞的作用
6、,我們選擇3種腫瘤細胞在多種磁場強度下作用,并對其結果作如下分析：從我們的實驗可以看到，磁場對多種腫瘤細胞均有明顯的抑制作用。Santi等4亦在實驗中證明磁場可抑制腫瘤細胞的生長,并可顯著延長荷瘤裸鼠的壽命，而在實驗的過程中，我們進一步觀察到，磁場對腫瘤細胞的抑制作用主要為誘導腫瘤細胞的凋亡,而并非殺傷作用。在培養(yǎng)的過程中,如果培養(yǎng)的周期超過一定的時間期限（如10天）,則3種腫瘤細胞在4種磁場強度作用下和正常的腫瘤細胞在MTT檢測及流式檢測上并無明顯的差異(P0.05)。因為一旦腫瘤細胞的生長速度超過了磁場對其的抑制作用，過長時間的培養(yǎng)結果將是腫瘤細
7、胞長滿整個培養(yǎng)瓶。我們選擇對數(shù)生長期細胞用MTT和流式細胞術兩個方面檢測腫瘤細胞的凋亡。磁場對腫瘤細胞的誘導凋亡作用也并非與磁場的強度呈簡單的線性比例關系。在實驗中觀察到，當磁場的強度過小（磁場強度＜1mT）,實驗中的3種腫瘤細胞在MTT和流式檢測上并沒有明顯的差異性；而當磁場的強度過大時，磁場也將影響到正常細胞的分裂過程，對其構成成直接的損傷作用5，這種過強的磁場強度,其治療腫瘤作用的可行性值得懷疑，我們的實驗可以看到,不同的細胞在某一種磁場強度下,其誘導凋亡的作用最大，其中MG63和MCF7均在20mT出現(xiàn)最大抑制率（分別為34.82％、31.0
8、6％），而HepG2在60mT出現(xiàn)最大抑制率（19.69％）。我們只是討論了3種腫瘤細胞的參考值,而多種腫瘤
