極低頻率電磁場(chǎng)對(duì)離體腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用

《極低頻率電磁場(chǎng)對(duì)離體腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、極低頻率電磁場(chǎng)對(duì)離體腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用【摘要】目的探討極低頻率電磁場(chǎng)對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。方法將人成骨肉瘤細(xì)胞（MG63）、乳腺癌細(xì)胞（MCF7）和肝癌細(xì)胞（HepG2）接種到96孔板中,并置于磁場(chǎng)強(qiáng)度分別為10mT、20mT、40mT、60mT的磁場(chǎng)中進(jìn)行干預(yù)，每天刺激2次，每次1h，作用3天，同時(shí)每種細(xì)胞設(shè)置正常條件下的對(duì)照組。3天后以MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性(OD值)，并采用流式細(xì)胞技術(shù)（AnnexinV—FITC和PI雙標(biāo)）檢測(cè)3種細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果72h后以MTT法檢測(cè)3種細(xì)胞的OD值，并于正常對(duì)照組進(jìn)行比較，SPSS軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，磁場(chǎng)組的O

2、D值較正常組低（P<0.05）;流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示，磁場(chǎng)組腫瘤細(xì)胞凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性比例高于正常組，兩組之間的差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論極低頻率電磁場(chǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯抑制作用，在一定程度上誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡?！娟P(guān)鍵詞】極低頻率電磁場(chǎng)腫瘤細(xì)胞凋亡MTT現(xiàn)國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者都有應(yīng)用磁場(chǎng)治療腫瘤的報(bào)道,并取得一定的療效。但磁場(chǎng)對(duì)于離體腫瘤細(xì)胞的作用及其原理的報(bào)道相對(duì)較少,本研究采用極低頻率電磁場(chǎng)干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的3種腫瘤細(xì)胞,并和正常生長(zhǎng)條件下的腫瘤細(xì)胞相比較,旨在了解磁場(chǎng)對(duì)體外生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞增殖、分化的影響,為磁場(chǎng)治療腫瘤提供實(shí)驗(yàn)性的依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1

3、.1磁場(chǎng)來(lái)源極低頻率電磁場(chǎng)由武漢市海軍工程學(xué)院提供（型號(hào)：DL—D03由天津中環(huán)電工有限公司制造）。額定電壓250V，單相頻率50Hz，由可調(diào)變壓器及電阻調(diào)節(jié)輸出磁場(chǎng)強(qiáng)度。1.1.2研究對(duì)象三種腫瘤細(xì)胞中HepG2由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院肝外科實(shí)驗(yàn)中心提供，MG63和MCF7由本實(shí)驗(yàn)室保存。1.1.3主要試劑胎牛血清和1640培養(yǎng)基為Hyclone公司產(chǎn)品。MTT、二甲基亞砜（DMSO）、Annexin－Ⅴ／FITC和PI、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、ELX800UV型酶標(biāo)測(cè)試儀、流式細(xì)胞儀（同濟(jì)醫(yī)學(xué)院免疫教研室）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1

4、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)觀察干預(yù)前及干預(yù)后72h,在相差顯微鏡下觀察各組3種細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)。1.2.2MTT(四甲基偶氮唑藍(lán))比色法測(cè)定細(xì)胞活力將培養(yǎng)至第三代的3種細(xì)胞以0.25％胰酶消化后，吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液（調(diào)整細(xì)胞密度為1.0×104），分別接種5塊到96孔板中。每塊96孔板1～3列為不含細(xì)胞的血清，以消除血清物質(zhì)對(duì)光吸收值的影響；4～6列為MG63細(xì)胞懸液；7～9列為MCF7細(xì)胞懸液；10～12列為HepG2細(xì)胞懸液。第1塊96孔板為正常對(duì)照組，放置于37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱；第2～5塊板分別放置于37℃、5％CO2并含有磁場(chǎng)線圈的培養(yǎng)箱中。96孔板放于線圈的中

5、央，通過(guò)調(diào)節(jié)變壓器來(lái)達(dá)到預(yù)設(shè)的磁場(chǎng)強(qiáng)度。第2～5塊96孔板的磁場(chǎng)強(qiáng)度分別為10mT、20mT、40mT、60mT，刺激時(shí)間為每天2次，每次持續(xù)1h。3天后每孔加入MTT溶液20μl，繼續(xù)孵育4h后終止培養(yǎng)。小心吸棄上清液，每小孔加入DMSO150μl融解結(jié)晶物，振蕩10min后在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔的吸光值。1.2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組3種腫瘤細(xì)胞凋亡的比例磁場(chǎng)強(qiáng)度及磁場(chǎng)作用的時(shí)間和方法同前。磁刺激停止后，胰酶消化細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/ml。取1ml細(xì)胞1000r/min4℃離心10min，棄上清；加入1ml4℃的PBS輕輕振蕩使細(xì)胞懸浮，1000r/min

6、4℃離心10min后棄上清，重復(fù)本步驟共3次；將細(xì)胞懸浮于250μl的結(jié)合緩沖液中，取100μl的細(xì)胞懸液于5ml流式管中，加入5μlAnnexin－Ⅴ／FITC和10μlPI溶液，混勻后室溫避光孵育15min，在反應(yīng)管中加入400μl的PBS后，流式細(xì)胞儀（FACS）檢測(cè)分析。每組取5樣本,每樣本計(jì)數(shù)1×106個(gè)細(xì)胞,并計(jì)算其陽(yáng)性率。在480nm的激發(fā)光下，檢測(cè)3種腫瘤細(xì)胞凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的比例。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示,采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2結(jié)果2.1各組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)觀察干預(yù)后至72h,磁場(chǎng)各組和對(duì)照組

7、腫瘤細(xì)胞均有明顯的生長(zhǎng),正常組細(xì)胞體積飽滿，細(xì)胞密集；磁場(chǎng)組細(xì)胞體積較正常組小,密度稀疏，貼壁細(xì)胞脫落,凋亡上浮的細(xì)胞明顯增多（通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)中收集3種貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞磁場(chǎng)干預(yù)72h后的細(xì)胞懸液進(jìn)行流式分析）。2.2MTT(四甲基偶氮唑藍(lán))比色法測(cè)定細(xì)胞活力在不同強(qiáng)度磁場(chǎng)刺激后各組的光密度值均數(shù)（OD值，±s）(見(jiàn)表1)和不同磁場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)腫瘤的抑制率（見(jiàn)表2）。結(jié)果可見(jiàn)，在正常對(duì)照組，3種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，其OD值均高于各磁場(chǎng)組；在各磁場(chǎng)組的OD值均有不同程度的下降，其最大抑制率可達(dá)34.82%（MG63，20mT組），其中MG63和MCF7均在20mT出現(xiàn)最大抑制率