膠體金免疫層析法快速檢測(cè)流感病毒應(yīng)用研究論文

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1、膠體金免疫層析法快速檢測(cè)流感病毒應(yīng)用研究論文李月越陳杭薇王萍李兵郭文忠【摘要】目的：觀察膠體金免疫層析（GICA）法檢測(cè)流感病毒的效果.方法：用間接免疫熒光法(IFA)作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，比較GICA與IFA兩種方法對(duì)同一份標(biāo)本甲型及乙型流感病毒檢測(cè)效果，對(duì)GICA法診斷試驗(yàn)做出評(píng)價(jià).結(jié)果：兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有較好的一致性，GICA法檢測(cè)流感病毒與IFA法檢測(cè)結(jié)果之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）.結(jié)論：GICA法操作簡(jiǎn)單、方便、快速，特異、靈敏，在臨床流感病毒抗原的檢測(cè)中具有較好的應(yīng)用價(jià)值.【關(guān)鍵詞】膠體金免疫層析；快速檢測(cè)；流感病

2、毒A型；流感病毒B型0引言目前檢測(cè)流感病毒的方法很多，但都存在各種不足，免疫金標(biāo)記技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物.freelAb由北京莊笛浩禾生物技術(shù)公司提供，有效期內(nèi)使用.IFA法所使用二抗：異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記山羊抗小鼠IgG購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，有效期內(nèi)使用.1.2方法1.2.1GICA法檢測(cè)于患者入院24h內(nèi)進(jìn)行，使用定制的玻璃試管中加入5mL緩沖液（PBS），一端連接負(fù)壓吸引器，一端連接細(xì)塑料導(dǎo)管，操作時(shí)將細(xì)導(dǎo)管經(jīng)鼻腔插入7～8cm到達(dá)鼻咽部，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)細(xì)導(dǎo)管并緩慢退出，吸取分泌物1～2mL分泌物，后

3、用滴管吹打數(shù)次（必要時(shí)加入抗粘液劑），然后將細(xì)胞懸液離心，棄上清，取沉淀液少許充分溶于裂解液中，用細(xì)管吸取裂解液，3～4滴于檢測(cè)卡加樣孔中，10～15min后觀察結(jié)果，在檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)各出現(xiàn)一條紅色色帶為陽(yáng)性，僅在對(duì)照區(qū)出色一條紅色色帶為陰性.1.2.2IFA法檢測(cè)與GICA法同時(shí)進(jìn)行，將用上述方法取得的同一患者的鼻咽部分泌物離心后棄上清液，取沉淀細(xì)胞涂片，風(fēng)扇吹干后丙酮固定.在制備好的細(xì)胞涂片上分別加入FluA,B特異性單克隆抗體20μL，置37℃恒溫箱20min，取出后用PBS液沖洗3遍，PB液洗1次，風(fēng)干.加入FITC標(biāo)記的

4、二抗，置37℃恒溫箱20min，洗片同上.熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，病毒感染的鼻咽部纖毛柱狀上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈分泌物草綠色熒光，找到3個(gè)以上典型感染細(xì)胞為陽(yáng)性.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS10.0forarχ2檢驗(yàn).2結(jié)果2.1GICA法與IFA法比較532例取鼻咽部分泌物分別用GICA法與IFA法檢測(cè)FluA，B.應(yīng)用GICA法檢出FluA抗原陽(yáng)性59例次，其中4例IFA法測(cè)陰性；應(yīng)用GICA法檢出FluA抗原陰性473例次，其中5例IFA法檢測(cè)陽(yáng)性.GICA法檢出FluB抗原陽(yáng)性31例次，其中2例IFA法檢測(cè)陰性；GICA法檢出FluB抗

5、原陰性501例次，其中3例IFA法檢測(cè)陽(yáng)性.GICA法檢測(cè)Flu陽(yáng)性結(jié)果見(jiàn)圖1.圖1GICA法快速診斷試紙條檢測(cè)Flu結(jié)果2.2臨床診斷一致性Kappa檢測(cè)GICA法檢測(cè)FluA，B結(jié)果與IFA法結(jié)果進(jìn)行一致性檢驗(yàn)Kappa分別為0.915，0.916，P=0.000，P0.05.說(shuō)明用GICA法檢測(cè)FluA，B與用IFA法檢測(cè)有較好的吻合性.2.3配對(duì)設(shè)計(jì)的McNemarχ2檢驗(yàn)GICA法檢測(cè)FluA,B結(jié)果與IFA法結(jié)果采用McNemarχ2檢驗(yàn),P均＞0.05；因此認(rèn)為GICA法檢測(cè)FluA，B與用IFA法檢測(cè)結(jié)果之間差異無(wú)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2.4常用診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)以IFA法為對(duì)照組，對(duì)GICA法檢測(cè)流感病毒進(jìn)行評(píng)價(jià),其中靈敏度、特異性、總符合率、Youden指數(shù)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值計(jì)陰性預(yù)測(cè)值均較高，假陽(yáng)性率及假陰性率較低，而Kappa值較高，吻合性較好(表1).表1GICA法檢測(cè)FluA，B的評(píng)價(jià)指標(biāo)3討論流感對(duì)人群尤其是兒童、老年人及機(jī)體免疫力低下的人群有較高的發(fā)病率及致死率，危害很大.流感病毒分為甲、乙、丙三型，其中變異大、危害重的主要是甲型和乙型流感病毒［2］.流感的確診需要實(shí)驗(yàn)室檢查證實(shí).目前較為常用檢測(cè)流感病毒主要有病毒分離培養(yǎng)、酶免疫、免疫熒光及

7、PCR技術(shù)［3］.因抗流感病毒藥物最好要在起始癥狀發(fā)生48h內(nèi)使用才能發(fā)揮較好療效，故快速流感檢測(cè)技術(shù)對(duì)制定預(yù)防措施及指導(dǎo)早期使用抗病毒藥物非常重要［4-5］.免疫熒光技術(shù)檢測(cè)病毒抗原已有20多年歷史，是快速而準(zhǔn)確的方法［6］.而其中IFA法因其具有穩(wěn)定、敏感、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，目前是諸多快速檢測(cè)病毒方法中的金標(biāo)準(zhǔn)，但缺點(diǎn)是需價(jià)格昂貴的免疫熒光顯微鏡，工作人員需具有一定的經(jīng)驗(yàn).GICA技術(shù)具有更簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，得以快速發(fā)展，已在醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物免疫、食品安全監(jiān)督各領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用［7］.該技術(shù)為建立了一種快速檢測(cè)流感

8、病毒方法提供了很好的技術(shù)平臺(tái)［8］.我們以IFA法為檢測(cè)流感病毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”，對(duì)GICA法進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用兩種方法檢測(cè)FluA,B結(jié)果的總符合率及吻合性較好，兩者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.通過(guò)各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)的計(jì)算，可以看出GICA法檢測(cè)流感病毒