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1、芹菜素對(duì)氧糖剝奪損傷小膠質(zhì)細(xì)胞的抗炎作用論文.freelol/L)組,其中DMSO組和芹菜素組小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行OGD8h,之后加入相應(yīng)藥物培養(yǎng)基,觀察24h后,收集細(xì)胞上清,用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測上清中IL-1β、TNF-α含量。結(jié)果24h后DMSO組細(xì)胞上清中IL-1β、TNF-α含量增多(P＜0.01)。芹菜素組TNF-α、IL-1β分泌量明顯低于DMSO組。芹菜素可以抑制OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),且呈劑量依賴性。結(jié)論芹菜素可以通過減少OGD/R小膠質(zhì)細(xì)胞中IL-1β、TNF-α的產(chǎn)生而發(fā)揮
2、神經(jīng)保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】氧糖剝奪；芹菜素；小膠質(zhì)細(xì)胞；白細(xì)胞介素-1β；腫瘤壞死因子-αAbstract：ObjectiveTostudytheneuroprotectiveeffectofapigeninonmicrogliaarymicroglialculturesneizedinto5groups：normalgroup,DMSOgroupandapigenin-treatedgroups(10,25,.freelol/L).ThecellsofDMSOgroupandapigenin-treat
3、edgroupicroglial.ConclusionApigeninmayplayaneuroprotectiveeffecticroglia.Keyicroglia；IL-1β；TNF-α小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量第三的細(xì)胞,是重要的免疫感受與效應(yīng)細(xì)胞,具有抗原提呈、分泌多種細(xì)胞因子、吞噬病原體和壞死組織以及神經(jīng)修復(fù)的作用。近年來對(duì)腦缺血再灌注的研究逐漸升溫,而小膠質(zhì)細(xì)胞在此過程中扮演一種特殊的免疫活性細(xì)胞,發(fā)揮著雙重作用。一方面,激活的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子
4、-α(TNF-α)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)等炎癥因子,加重腦損傷；另一方面,激活的小膠質(zhì)細(xì)胞還可轉(zhuǎn)化為吞噬細(xì)胞,清除死亡的神經(jīng)元,同時(shí)分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、胰島素樣生長因子1(IGF1)、堿性成纖維生長因子(bFGF)、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)等神經(jīng)營養(yǎng)因子,支持神經(jīng)元的存活,重建缺血區(qū)內(nèi)的穩(wěn)態(tài)1。因此,腦缺血后適度的小膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)可能有神經(jīng)保護(hù)和抑制凋亡的作用,深入研究小膠質(zhì)細(xì)胞在腦缺血過程中的作用,可為臨床治療腦缺血提供新的途徑。本研究采用了體外氧糖剝奪(OGD)后復(fù)氧復(fù)糖
5、模型(OGD/R)來模擬小膠質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)缺血缺氧狀態(tài),與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相比,可以更好地單獨(dú)研究小膠質(zhì)細(xì)胞在缺血缺氧中的變化2。芹菜素(apigenin)屬黃酮類化合物,有“植物雌激素”之稱,大量存在于水果、蔬菜、豆類、茶葉中,其中芹菜中含量最高。芹菜素的化學(xué)結(jié)構(gòu)為4,5,7-三羥黃酮,其分子式為C15H10O6,相對(duì)分子質(zhì)量為270,其4,5,7位置的3個(gè)羥基和C2C3雙鍵決定了其獨(dú)特的藥理學(xué)效應(yīng)和生物學(xué)特性。研究發(fā)現(xiàn),芹菜素具有神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、自由基清除劑、抗腫瘤、抗炎、碳水化合物代謝促進(jìn)因子、免疫調(diào)節(jié)劑
6、等作用3。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谘芯壳鄄怂貑为?dú)作用于體外缺血缺氧小膠質(zhì)細(xì)胞,對(duì)其細(xì)胞活化和細(xì)胞因子分泌的影響。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物新生SD大鼠(出生48h以內(nèi)),溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥物及試劑DMEM/F12高糖培養(yǎng)基,特優(yōu)級(jí)胎牛血清(吉諾公司),鹽酸利多卡因(10mL注射液,有效含量0.12g,分子量288.182),青霉素-鏈霉素(100×,上海碧云天生物技術(shù)有限公司),多聚賴氨酸(上海碧云天生物技術(shù)有限公司),0.25%Trypsin-EDTA(Gibco公司)。生物素標(biāo)記GSA-IB4(B
7、S-1IsolectinB4BiotinConjugate,Sigma公司),HRP-鏈酶親和素(北京中杉公司),DAB顯色試劑盒(北京中杉公司)。芹菜素(陜西慧科植物開發(fā)有限公司),用100%二甲基亞砜(DMSD,Sigma公司)作為溶劑,配制成40mmol/L的濃縮液,濾器過濾除菌,-20℃?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)當(dāng)日用完全培養(yǎng)基配制成芹菜素工作液,質(zhì)量濃度分別為10、25、50μmol/L,DMSO終濃度在0.2%以下。1.3儀器ThermoForma310系列CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡及照相系統(tǒng)(Nikon公司
8、),ThermoHERAcell三氣培養(yǎng)箱。2實(shí)驗(yàn)方法2.1混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)采用McCarthy混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)方法4,并加以改良。新生SD大鼠冰上麻醉10min,無菌環(huán)境下開顱取腦,冷DMEM/F12溶液清洗血污,并用小毛刷仔細(xì)剔除腦膜及血管。剔除小腦保留全部大腦,剪碎至1mm3的組織塊,用預(yù)熱至37℃的0.125%Trypsin-EDTA37℃消化5min,完全培養(yǎng)基終止消化后吸管吹打混勻,1000r/min離心5min,棄上清,加入含
