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《脂多糖誘導小鼠肝損傷介質(zhì)水平變化及五靈膠囊的作用 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、脂多糖誘導小鼠肝損傷介質(zhì)水平變化及五靈膠囊的作用：劉明義，王勝春，趙慧萍【摘要】 目的探討脂多糖（LPS）誘導小鼠肝損傷介質(zhì)水平變化及五靈膠囊的作用。方法小鼠尾靜脈注射（iv）LPS3.5mg/kg，酶法檢測3，6，12和24h小鼠血清ALT、AST、ALP、TRIG，化學法測定肝組織內(nèi)MDA、NOS水平，免疫組化檢測肝組織內(nèi)TNF-α，CD14，iNOS，eNOS的陽性表達率。結(jié)果與正常組比較,小鼠iv注射LPS后3h血清ALT，AST水平明顯升高并持續(xù)至12h，24h下降仍顯著高于正常組，ALP水平明顯持續(xù)下降。在12hMDA含量顯著
2、升高，24h下降但明顯高于正常組，而甘油三酯（TG）水平各時間點明顯升高，TNF-α，CD14，iNOS，eNOS陽性表達率上調(diào)。五靈膠囊能明顯降低ALT，AST水平和MDA含量，對ALP和TRIG水平無作用，抑制肝組織內(nèi)TNF-α，CD14，iNOS，eNOS陽性表達率。結(jié)論MDA，TNF-α，CD14，iNOS，eNOS參與了LPS誘導肝損傷，五靈膠囊抑制LPS誘導肝損傷的作用機制與抑制活性遞質(zhì)生成有關。【關鍵詞】肝損傷一氧化氮合酶活性介質(zhì)脂多糖 Abstract：ObjectiveToexplorethechangeofmediat
3、orlevelsinhepaticinjuredmiceinducedbyLipoplysaccharide(LPS)andeffectsofethodsLPSicebyinjectiong/kgviathetailvein,3,6,12,24hourslater,thelevelsofALT,AST,ALPinserumemethodandthecontentsofMDA,NOSinhepatictissueofmiceinedbychemistry,immunohistochemistrymethodployedtodeterminet
4、heexpressionofTNF-α,CD14,iNOSandeNOSinhepatictissue.Results3hoursafterLPSice,paredalgroup,thelevelsofALTandASTalgroup.ThelevelofALPal.Theleveloftriglyceridesarkedlyup-regulated.ConclusionThemediatorsasMDA,TNF-α,CD14,iNOS,eNOSparticipatedinliverinjuryinducedbyLPS,theprotect
5、ivemechanismDA）,一氧化氮合酶（NOS）試劑盒（南京建成）；Rabbitanti-CD14，TNF-α，NOSⅡ（iNOS），NOSⅢ（eNOS）一抗（武漢博士德）；S-P超敏試劑盒（福州邁新）；脂多糖（LPS）（Sigma公司）；五靈膠囊（中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科提供，批號：20040122），稱取五靈膠囊2g，蒸餾水加熱溶解至10ml為經(jīng)口給藥供試液?！ ?方法 2.1LPS誘導小鼠肝損傷血清酶實驗取昆明小鼠96只，隨機分成3組（每組設4個時間點：3，6，12，24h）：正常組、LPS組、五靈膠囊組，每組
6、每時間點8只。正常組和LPS組分別ig蒸餾水10ml/kg，五靈膠囊組ig五靈膠囊2.0g/kg，各組小鼠ig給藥1次/d，連續(xù)給藥5次，小鼠禁食自由飲水，末次給藥2h后正常組各時間點小鼠尾靜脈注射(iv)生理鹽水2ml/kg，其余2組各時間點小鼠ivLPS3.5mg/kg，iv后分別于3，6，12，24h眼眶取血，放置30min，離心，分離血清，酶法測定TRIG，ALT，AST，ALP。 2.2肝組織內(nèi)MDA、TRIG、NOS測定和免疫組化實驗迅速取上述實驗小鼠肝臟剔去膽囊，用冰冷生理鹽水洗去血漬，濾紙吸干水分，除肝大葉外的肝組織制成1
7、0%肝勻漿，10000r/min離心，取上清按試劑盒說明書測定MDA、TRIG、NOS：肝大葉用10%甲醛（0.01mol/L）磷酸緩沖液固定48h，石蠟包埋、切片，脫蠟至水洗,分別與抗CD14、抗TNF-α、抗iNOS、抗eNOS（1∶100）進行孵育，按試劑盒操作說明進行免疫組化反應，用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）-0.3mlH2O2/L系統(tǒng)顯色10min。蘇木素襯染、脫水透明后，中性樹膠封片。陰性對照片用PBS替代一抗。結(jié)果評定：標本無明確陽性反應者為陰性，在40倍鏡下以Miaspro圖象分析系統(tǒng)程序掃描染色陽性細胞,每只小鼠肝組織掃描5個
8、視野計數(shù)陽性細胞，結(jié)果以陽性細胞率表示?！ ?.3統(tǒng)計學處理采用SPSS10.0版統(tǒng)計軟件，所測數(shù)據(jù)以（±s）表示，采用單因素方差分析?！ ?結(jié)果 3.1LPS誘導小鼠肝損傷不
