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1、脂多糖誘導(dǎo)小鼠肝損傷介質(zhì)水平變化及五靈膠囊的作用論文劉明義，王勝春，趙慧萍【摘要】目的探討脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠肝損傷介質(zhì)水平變化及五靈膠囊的作用。方法小鼠尾靜脈注射（iv）LPS3.5mg/kg，酶法檢測(cè)3，6，12和24h小鼠血清ALT、AST、ALP、TRIG，化學(xué)法測(cè)定肝組織內(nèi)MDA、NOS水平，免疫組化檢測(cè)肝組織內(nèi)TNF-α.freelediatorlevelsinhepaticinjuredmiceinducedbyLipoplysaccharide(LPS)andeffectsofethodsLPSicebyinjectiong/kgviathetailvei
2、n,3,6,12,24hourslater,thelevelsofALT,AST,ALPinserumemethodandthecontentsofMDA,NOSinhepatictissueofmiceinedbychemistry,immunohistochemistrymethodployedtodeterminetheexpressionofTNF-α,CD14,iNOSandeNOSinhepatictissue.Results3hoursafterLPSice,.freelalgroup,thelevelsofALTandASTalgroup.Thelevelof
3、ALPal.Theleveloftriglyceridesarkedlyup-regulated.ConclusionThemediatorsasMDA,TNF-α,CD14,iNOS,eNOSparticipatedinliverinjuryinducedbyLPS,theprotectivemechanismDA）,一氧化氮合酶（NOS）試劑盒（南京建成）；Rabbitanti-CD14，TNF-α，NOSⅡ（iNOS），NOSⅢ（eNOS）一抗（武漢博士德）；S-P超敏試劑盒（福州邁新）；脂多糖（LPS）（Sigma公司）；五靈膠囊（中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥
4、劑科提供，批號(hào)：20040122），稱取五靈膠囊2g，蒸餾水加熱溶解至10ml為經(jīng)口給藥供試液。2方法2.1LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷血清酶實(shí)驗(yàn)取昆明小鼠96只，隨機(jī)分成3組（每組設(shè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：3，6，12，24h）：正常組、LPS組、五靈膠囊組，每組每時(shí)間點(diǎn)8只。正常組和LPS組分別ig蒸餾水10ml/kg，五靈膠囊組ig五靈膠囊2.0g/kg，各組小鼠ig給藥1次/d，連續(xù)給藥5次，小鼠禁食自由飲水，末次給藥2h后正常組各時(shí)間點(diǎn)小鼠尾靜脈注射(iv)生理鹽水2ml/kg，其余2組各時(shí)間點(diǎn)小鼠ivLPS3.5mg/kg，iv后分別于3，6，12，24h眼眶取血，放置30min，離
5、心，分離血清，酶法測(cè)定TRIG，ALT，AST，ALP。2.2肝組織內(nèi)MDA、TRIG、NOS測(cè)定和免疫組化實(shí)驗(yàn)迅速取上述實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟剔去膽囊，用冰冷生理鹽水洗去血漬，濾紙吸干水分，除肝大葉外的肝組織制成10%肝勻漿，10000r/min離心，取上清按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定MDA、TRIG、NOS：肝大葉用10%甲醛（0.01mol/L）磷酸緩沖液固定48h，石蠟包埋、切片，脫蠟至水洗,分別與抗CD14、抗TNF-α、抗iNOS、抗eNOS（1∶100）進(jìn)行孵育，按試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行免疫組化反應(yīng)，用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）-0.3mlH2O2/L系統(tǒng)顯色10min。蘇木素襯染、脫水透
6、明后，中性樹膠封片。陰性對(duì)照片用PBS替代一抗。結(jié)果評(píng)定：標(biāo)本無(wú)明確陽(yáng)性反應(yīng)者為陰性，在40倍鏡下以Miaspro圖象分析系統(tǒng)程序掃描染色陽(yáng)性細(xì)胞,每只小鼠肝組織掃描5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞，結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞率表示。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS10.0版統(tǒng)計(jì)軟件，所測(cè)數(shù)據(jù)以（±s）表示，采用單因素方差分析。3結(jié)果3.1LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷不同時(shí)間血清酶的變化及五靈膠囊的作用血清酶學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示，小鼠ivLPS后3h血清ALT值上升最高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其值逐漸下降，在24hALT值有所降低但仍明顯高于正常組，AST水平3h升高，12h達(dá)最高，24h下降仍明顯高于正常組；ALP3h明顯
7、下降，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其值下降更低。與LPS組比較，五靈膠囊組3h血清ALT和AST值高于LPS組，6h與LPS組一致，12h明顯低于LPS組，24h繼續(xù)下降，五靈膠囊對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠肝內(nèi)ALP下降無(wú)作用。見表1。表1肝損傷小鼠不同時(shí)間血清酶的變化及五靈膠囊的作用（略）3.2對(duì)LPS誘導(dǎo)肝內(nèi)MDA，TRIG，NOS含量影響小鼠ivLPS后3h，與正常組比較，肝內(nèi)MDA含量升高，12h顯著升高并達(dá)到高峰，24h下降但明顯高于正常組(P0.05)。小鼠LPS攻擊后3h肝內(nèi)TRIG含量無(wú)變化，6hTRIG值上升
