sod活性測(cè)定pod活性測(cè)定cat活性測(cè)定質(zhì)膜透性測(cè)定mda含量測(cè)定色素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案及數(shù)據(jù)記錄表格

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1、SOD活性測(cè)定POD活性測(cè)定CAT活性測(cè)定質(zhì)膜透性測(cè)定MDA含量測(cè)定色素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案SOD活性測(cè)定POD活性測(cè)定CAT活性測(cè)定質(zhì)膜透性測(cè)定MDA含量測(cè)定色素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案一、細(xì)胞質(zhì)膜透性的測(cè)定(電導(dǎo)法)材料、儀器設(shè)備1.材料:植物葉片,每個(gè)樣本1cm2的小葉片1g。2.儀器藥品:洗潔精;電導(dǎo)儀;電子天平;冰箱;真空泵;真空干燥器;恒溫培養(yǎng)箱;電爐;50ml燒杯;50ml量筒;小鑷子;紗布;表皿;濾紙條;鏡頭紙;剪刀;玻棒;膠頭滴管;瓷盤。實(shí)驗(yàn)步驟1.清洗用具所用玻璃用具均需先用洗潔精清洗,然后用自來(lái)水洗3次,再用蒸餾水洗3次,然后放入或倒置在洗凈的且墊有潔凈濾紙的器皿中干燥后備用。2.實(shí)

2、驗(yàn)材料的準(zhǔn)備及處理選取葉齡葉位長(zhǎng)勢(shì)均相似的植物葉片,剪下后用濕布包住放在已經(jīng)編號(hào)的保鮮袋中,最后用保鮮盒封存帶回。實(shí)驗(yàn)前用自來(lái)水沖洗葉片,除去表面沾污物,再用蒸餾水沖洗2次,用潔凈濾紙輕輕吸干葉片表面水分放于已編號(hào)的潔凈器皿中,然后分別剪成約1cm2的小葉片(或用直徑為1cm2的打孔器鉆取小圓片),注意除掉大葉脈。將剪下的小葉片分別混合均勻,每個(gè)樣本再快速稱取鮮樣2份,每份0.5g,分別放入編號(hào)為X-n-a、X-n-b的50ml燒杯中,另取編號(hào)C的燒杯,不加鮮樣留作空白本底對(duì)照。每個(gè)樣本的三個(gè)燒杯中均加入蒸餾水30ml浸泡,將盛有鮮樣的a、b燒杯放入真空干燥器中,用真空泵抽氣25min(以抽出

3、細(xì)胞間隙中的空氣),然后緩緩放入空氣,從真空干燥器中取出a、b燒杯,a、C杯繼續(xù)常溫浸泡,b杯稱重,蓋上表皿,置于電爐上煮沸15min,冷卻后再稱重并加蒸餾水至原重量,繼續(xù)室溫自然浸泡45min即可測(cè)定。各樣本處理時(shí)浸泡時(shí)間和處理溫度要保持一致,均保持在室溫下。(注:自然浸泡需要4~5h以上,為防止樣品表面氣泡的影響故用真空干燥管去除氣泡,也可以在振蕩器上浸泡1~2h。)3.測(cè)定電導(dǎo)值在測(cè)定前先將各杯浸泡液搖勻,測(cè)出各杯樣本浸出液電導(dǎo)率值,記錄到原始數(shù)據(jù)表上相應(yīng)欄中。(注意:每測(cè)定完一個(gè)樣液后,用蒸餾水漂洗電極,再用濾紙將電極擦干,然后進(jìn)行下一個(gè)樣液的測(cè)定)原始數(shù)據(jù)表樣表如下:電導(dǎo)率測(cè)定記錄表

4、:備注:時(shí)間:______年___月___日________________實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):_____________________________實(shí)驗(yàn)者:__________________記錄者:___________________核對(duì)者:________________10/10SOD活性測(cè)定POD活性測(cè)定CAT活性測(cè)定質(zhì)膜透性測(cè)定MDA含量測(cè)定色素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案樣本編號(hào)處理電導(dǎo)率值(μS·cm-1)相對(duì)外滲率(%)空白對(duì)照C管(常溫蒸餾水空白)___—___(第X組第n個(gè)重復(fù))a管(常溫)b管(煮沸)___—___a管(常溫)b管(煮沸)___—___a管(常溫)b管(煮沸)4、結(jié)果計(jì)

5、算按下公式計(jì)算低溫及常溫處理電解質(zhì)的相對(duì)外滲率:電解質(zhì)的相對(duì)外滲率(%)=×100%二、葉綠素含量的測(cè)定(丙酮提取法)材料、儀器設(shè)備1.材料:植物葉片,每個(gè)樣本0.5g。2.儀器藥品:分光光度計(jì)、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管;95%乙醇(或80%丙酮)、石英砂、碳酸鈣粉。實(shí)驗(yàn)步驟1.實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備及處理分別取新鮮潔凈葉片,去除中脈剪碎。各稱取剪碎的新鮮樣品0.5g,放入潔凈的研缽中(研完一個(gè)樣本需將研缽洗凈烘干才可研下一個(gè)樣本),加少量石英砂和碳酸鈣粉及2mL95%乙醇研成均漿,再加乙醇5mL,繼續(xù)研磨至組織變白,靜置3~5min。取

6、濾紙1張置于漏斗中,用乙醇濕潤(rùn),沿玻棒把各樣本提取液倒入漏斗(用漏斗過(guò)濾完一個(gè)樣本需將漏斗洗凈烘干才可過(guò)濾下一個(gè)樣本),濾液流至25mL已編號(hào)的棕色容量瓶中;用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小S玫喂芪∫掖?,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中,直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。最后用乙醇定容至25mL,搖勻。2.測(cè)定樣本吸光度10/10SOD活性測(cè)定POD活性測(cè)定CAT活性測(cè)定質(zhì)膜透性測(cè)定MDA含量測(cè)定色素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)方案以95%乙醇為空白對(duì)照來(lái)調(diào)零,對(duì)各樣本葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)665nm、645nm和652nm下測(cè)定吸光度,記入原始數(shù)據(jù)記錄表中。樣表如下:備注:時(shí)

7、間:______年___月___日________________實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):_____________________________實(shí)驗(yàn)者:__________________記錄者:___________________核對(duì)者:________________Cary:WaveLength(nm):645nm、652nm、665nmAveTime(sec):0.1Replicates:3樣本總

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