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《中藥治療對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后mrnangf表達(dá)的影響論文》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中藥治療對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后mRNANGF表達(dá)的影響論文.freel處造成坐骨神經(jīng)擠壓傷,根據(jù)分組,術(shù)后給予不同的中藥喂養(yǎng)大鼠。術(shù)后不同時(shí)間,取緊鄰擠壓傷部位遠(yuǎn)側(cè)神經(jīng)干.freelRNA(mRNANGF)的表達(dá)。結(jié)果丹參組和黃芪組大鼠坐骨神經(jīng)擠壓傷后第2周起,坐骨神經(jīng)組織中mRNANGF表達(dá)明顯增加,至傷后第4周達(dá)到高峰。黨參治療坐骨神經(jīng)擠壓傷,治療后8周,mRNANGF表達(dá)較對(duì)照組明顯增加,差異有顯著性。在復(fù)方?jīng)_劑組,大鼠坐骨神經(jīng)擠壓傷后8周內(nèi),神經(jīng)組織中mRNANGF表達(dá)始終處于高水平。各組大鼠坐骨神經(jīng)mRNANGF表達(dá)與對(duì)照組之間的差異具有顯著性(P<0.05)。復(fù)方?jīng)_劑組大鼠坐骨神經(jīng)
2、mRNANGF表達(dá)與丹參和黃芪組之間的差異也具有顯著性。結(jié)論中藥黨參、丹參和黃芪可以促進(jìn)擠壓傷后大鼠坐骨神經(jīng)mRNANGF表達(dá);這種作用在組成復(fù)方?jīng)_劑后,表現(xiàn)得更為明顯?!娟P(guān)鍵詞】中藥;坐骨神經(jīng)損傷;神經(jīng)生長(zhǎng)因子mRNA【Abstract】ObjectiveTodecideprovingtheregenerationofperipheralnerveafternervelesionandtostudythemechanismofChineseherb.Methods108SDrats(male,220~250g)ixedgroupandcontrolgroup.Theratsdistalto
3、sciaticnotch.AftersurgerytheratseafteroperationtheratpjustdistaltothecrushsiteovedtoevaluatethelevelofmRNANGF.mRNANGFeansofinsituhybridizationandthelevelinedbyimaginganalysis.ResultsInDanshenandHuangqigroupsthelevelsofmRNANGFinsciaticnervemarkedlyincreasedatthesecondRNANGFinthesetixedgroupthemRNANG
4、FareallinhighlevelparedRNANGFinDangshengroupixedherbscanincreasetheexpressionofmRNANGFofratsciaticnerveandimprovetheregenerationofsciaticnerveafternervecrushed.【KeyRNA復(fù)方神肌再生沖劑對(duì)神經(jīng)再生的促進(jìn)作用已經(jīng)被實(shí)驗(yàn)研究初步證實(shí)[1,2]。為了研究中藥復(fù)方神肌再生沖劑及其組成成分對(duì)神經(jīng)再生的影響,我們?cè)鴳?yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)中藥治療后損傷的大鼠坐骨神經(jīng)組織NGF蛋白表達(dá)[3]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛躍發(fā)展,運(yùn)用先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)手段,
5、檢測(cè)神經(jīng)生長(zhǎng)因子mRNA(mRNANGF)在神經(jīng)組織中的表達(dá)來判斷神經(jīng)再生,其敏感度比檢測(cè)NGF的方法要高得多。我們應(yīng)用原位分子雜交的方法,研究復(fù)方神肌再生沖劑治療大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)mRNA(mRNANGF)的變化,確定中藥復(fù)方神肌再生沖劑中對(duì)神經(jīng)再生有促進(jìn)作用的單味中藥。1材料與方法1.1動(dòng)物選擇及分組SD大鼠,健康,雄性,體重230~250g,SPF級(jí)。由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。實(shí)驗(yàn)組90只大鼠分為5個(gè)處理組,分別為黨參組、丹參組、黃芪組、生地組和復(fù)方?jīng)_劑組。每處理組18只大鼠再按術(shù)后取材時(shí)間分為術(shù)后2周、4周和8周3個(gè)時(shí)間組,每時(shí)間組6只。對(duì)照組30只大鼠分
6、為5個(gè)時(shí)間組,分別為術(shù)后2天、1周、2周、4周和8周,每時(shí)間組6只大鼠。1.2動(dòng)物模型制作1%硫噴妥鈉腹腔注射麻醉。局部脫毛,消毒。取右側(cè)為手術(shù)側(cè)。沿右側(cè)臀大肌纖維方向做右臀及大腿上部皮膚切口,分開臀肌顯露坐骨神經(jīng)。于坐骨結(jié)節(jié)遠(yuǎn)側(cè)0.8cm,坐骨神經(jīng)分出支配大腿肌肉的分支之近側(cè),用帶卡扣的無齒顯微持針器夾住坐骨神經(jīng),合攏卡扣30s,造成神經(jīng)擠壓傷(crush)[4]。在損傷部位用11-0的無損傷縫線固定于神經(jīng)外膜作為標(biāo)記,傷口內(nèi)置適量青霉素粉劑,關(guān)閉切口。術(shù)后將大鼠分籠飼養(yǎng),每籠3只。常規(guī)供給大鼠專用飼料和飲用水,室內(nèi)20℃恒溫。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組,每日給予相應(yīng)的中藥湯劑2ml灌胃。對(duì)照組大鼠術(shù)后
7、給等量生理鹽水灌胃。按分組要求,術(shù)后取緊鄰擠壓傷部位遠(yuǎn)側(cè)坐骨神經(jīng)干0.6cm,迅速置入4%多聚甲醛溶液固定。另取正常大鼠6只,取其右側(cè)坐骨神經(jīng)相應(yīng)部位神經(jīng)干,作為正常神經(jīng)標(biāo)本,用以檢測(cè)正常神經(jīng)mRNANGF。標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定24h后,脫水,石蠟包埋。常規(guī)石蠟切片,厚度為4μm。載玻片需要經(jīng)過高溫滅活RNA酶,APES鍍膜。切片置4℃冰箱保存。1.3原位分子雜交實(shí)驗(yàn)方法[5]及步驟NGF型原位雜交檢測(cè)