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1、He┐Ne激光照射對(duì)大鼠神經(jīng)損傷后脊髓CGRP表達(dá)的影響 摘要:目的研究10mETHODSInjuredsciaticnerves，madein96SDrats，munohistochemicallystudied.RE┐SULTSExpressionofCGRPincreasedinspinalcordonthefirstdayafterinjuryofsciaticnerve.Moreexpressionof CGRPinsecondandfourthainlyfoundinmotorneuroninanteriorhorna
2、ndsensorynervefiberinposteriorhorn.Ateighthainedahighexpressioninbothgroups，andshootenerveregeneration. 0引言 He-Ne激光有廣泛的生物學(xué)作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察均證實(shí)激光照射有促進(jìn)外周神經(jīng)生長(zhǎng)的作用［1］，其作用機(jī)制尚待探討.降鈣素基因相關(guān)肽（cal-citoningene-relatedpeptide，CGRP）是由37個(gè)氨基酸殘基組成的神經(jīng)多肽［2，3］，起著遞質(zhì)或細(xì)胞外調(diào)節(jié)物樣作用，由降鈣素基因家族編碼，但化學(xué)結(jié)構(gòu)、
3、體內(nèi)分布及生物活性不同于降鈣素，主要分布在神經(jīng)系統(tǒng)中［4］，具有舒血管作用，在神經(jīng)再生過(guò)程中起一定作用［5］.我們觀察了He-Ne激光照射損傷大鼠坐骨神經(jīng)后脊髓CGRP表達(dá)的變化. 1材料和方法 1.1動(dòng)物模型及照射方法SD成年雄性大鼠96只，體質(zhì)量（250±20）g，10gL-1戊巴比妥鈉（30mgkg-1，ip）麻醉，常規(guī)消毒，取右側(cè)股后外側(cè)暴露坐骨神經(jīng)，于神經(jīng)分叉上0.7cm處眼科剪剪斷，并修剪神經(jīng)斷端的覃狀頭，原位吻合以9個(gè)0的絲線縫合神經(jīng)外膜4～6針，吻合后創(chuàng)口內(nèi)放入慶大霉素2萬(wàn)單位關(guān)閉創(chuàng)口，對(duì)等分激光照射組和對(duì)照組各
4、48只處理.He-Ne激光器（西安產(chǎn)）波長(zhǎng)632.8nm，激光照射組照射功率為10m，功率密度為35.39m-2，對(duì)準(zhǔn)神經(jīng)吻合處每次照射10min，照射能量密度為21.23Jcm-2，對(duì)照組做相同處理，激光照射功率輸出為0mL，40gL-1多聚甲醛快速灌注200mL，緩慢滴注300mL，持續(xù)1.5～2h，而后取坐骨神經(jīng)及相應(yīng)脊髓，浸入200gL-1蔗糖液（0.01molL-1PB）4℃過(guò)夜，恒冷箱切片，片厚30μm.用0.01molL-1PBS清洗10min×3→浸入含3gL-1Triton×100的0.01molL-1PBS30m
5、in→0.01molL-1PBS清洗10min×3→加羊抗CGRP（12000，Sigma）4℃孵育48h，取出入0.01molL-1PBS清洗10min×3→加入兔抗羊抗體（1200，Sigma）室溫孵育2h→入0.01molL-1PBS清10min×3→浸入ABC復(fù)合物（1500，Sigma）室溫孵育2h，浸洗硫酸鎳胺加強(qiáng)的DAB藍(lán)色反應(yīng)法顯色、貼片、干燥、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片.應(yīng)用LeicaQ570c真彩色圖像分析儀（德國(guó)），進(jìn)行灰度定量分析，每張切片在損傷側(cè)后角的第3，4板層選5個(gè)高倍視野進(jìn)行陽(yáng)性物質(zhì)密度值測(cè)定，取測(cè)定數(shù)
6、值減去背景測(cè)定數(shù)值的絕對(duì)值，t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析. 圖1－圖2略 2結(jié)果 成年大鼠腰骶段脊髓中CGRP陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)目較少，每一切面多為有1～2個(gè)CGRP陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，均為前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，染色較淡，無(wú)明顯陽(yáng)性纖維，陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞多為大細(xì)胞，呈圓形或多角形，樹(shù)突較短，陽(yáng)性物質(zhì)主要集中在胞質(zhì)，胞核為陰性.坐骨神經(jīng)損傷后1d即發(fā)現(xiàn)損傷側(cè)CGRP陽(yáng)性反應(yīng)增強(qiáng)，1的相干光，有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，作用于生物組織可使生物膜分子構(gòu)象發(fā)生改變，改變膜受體結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞活性發(fā)生變化，有明顯的生物學(xué)刺激作用［6］.神經(jīng)修復(fù)是一個(gè)較為復(fù)雜的過(guò)程，外周神經(jīng)元損傷
7、后可產(chǎn)生一系列的化學(xué)和組織學(xué)變化，一般認(rèn)為，在這種變化中，與神經(jīng)遞質(zhì)代謝有關(guān)的酶蛋白的合成下調(diào)，而與軸突存活和修復(fù)有關(guān)的結(jié)構(gòu)蛋白的合成增加，如神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）［7］和生長(zhǎng)相關(guān)蛋白（GAP-43）［8］的表達(dá).外周軸突損傷后，可導(dǎo)致CGRP在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中含量增高，而He-Ne激光作為一種外界物理因子，通過(guò)其生物刺激作用使脊髓內(nèi)CGRP表達(dá)增高.激光照射組2araSG，JonasV，RosenfeldMG，OngES，EvansRM.Al-ternativeRNAprocessingincalcitoningeneexpressi
8、ongeneratesmRNAsencodingdifferentpolypeptideproducts［J］.Nature，1982;298（5871）:240-244.［3］RosenfeldMG，MermondJJ，AmaraS
