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《卵巢癌抗獨特型單鏈抗體6b11scfvmgm-csf融合蛋白的構建、表達及活性測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。
1、卵巢癌抗獨特型單鏈抗體6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的構建、表達及活性測定解剖學報2000年第3期第31卷論著作者：劉蓓 崔恒 馮捷 葉雪 李藝 曹善津 葛華 付天云 姚煜 錢和年單位：劉蓓（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）；崔恒（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）；馮捷（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）；葉雪（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）；李藝（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）；曹善津
2、（北京醫(yī)科大學人民醫(yī)院婦科腫瘤中心，北京 100044）關鍵詞：卵巢癌；重組融合蛋白；抗體；抗獨特型；粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子；包涵體 【摘要】 目的 構建卵巢癌抗獨特型單鏈抗體6B11ScFv和鼠GM-CSF融合蛋白(6B11mGM)，以觀察其在動物體內誘導的特異性免疫反應，為卵巢癌抗獨特型疫苗應用于臨床提供依據?！》椒ā∮肈NA重組技術，將mGM-CSF連于單鏈抗體6B11ScFv羧基末端，構建重組質粒pET30-6B11mGM，轉化大腸桿菌BL21(DE3)，IPTG誘導，以包涵體形式獲高效表達，
3、超聲破碎細菌細胞獲得包涵體，用8mol·L-1尿素溶解包涵體后直接稀釋復性，SDS-PAGE分析蛋白純度，ELISA分析技術和細胞增殖實驗測定融合蛋白的抗體和細胞因子活性?！〗Y果 復性蛋白純度達90%以上。采用氧化型谷胱甘肽(GSSG)濃度為1mmol·L-1，還原型谷胱甘肽(GSH)濃度為5mmol·L-1，10℃復性48h，復性率達36%。表達的融合蛋白分別能與COC166-9單抗和大鼠抗小鼠GM-CSF單抗特異結合，并能刺激mGM-CSF依賴株NFS-60細胞增殖?！〗Y論 以包涵體表達的融合蛋白6B11
4、mGM保留了兩種蛋白的活性，為研究融合蛋白在體內的免疫功能提供了基礎。 【中圖分類號】 R392.11 【文獻標識碼】 A 【文章編號】 0529-1356(2000)03-226THECONSTRUCTION，EXPRESSIONANDACTIVITYEXAMINATIONS OF6B11ScFv／MURINEGM-CSFFUSIONPROTEINLIUBei,CUIHeng,FENGJie,YEXue,LIYI,CAOShan-jin,GEHua,FUTian-yun,YAOYu,QIANHe-nia
5、n (GynecologicOncologyCenter,People'sHospital,BeijingMedicalUniversity,Beijing 100044,China) 【Abstract】 Objective Toconstructexpressionvectorwhichexpressesfusionproteinofantiidiotypicsinglechainantibody6B11ScFvandmurineGM-CSF(6B11mGM)forobservingitspossi
6、bleimmunereactionsinvivo.Methods UsingDNArecombinanttechniques,themurineGM-CSFcDNAgenewasrecombinedto6B11ScFvandtheywereclonedintoexpressionvectorpET-30a(+)toproduceinsolubleprotein.Inclusionbodiescollectedafterthebreakageofbacteriathroughsonicationweresubj
7、ectedtorepeatedlywashing.Inclusionbodiessolubilizedintheresenceof8mol·L-1ureaweredilutedwithrenaturationsolutionssothatfoldingprocesscouldbeinitiated.ThepuritywasexaminedbySDS-PAGE,ELISAandcellproliferationassaywereusedtodeterminetheactivitiesoffusionprotei
8、n.Results 6B11mGMfusionproteinswereobtainedwithapurityofover90%.Theoptimumconditionswere1mmol·L-1and5mmol·L-1fortheconcentrationsofGSSGandGSH,respectively,with48hoursat10℃asrenaturedtime.Fusionproteinc
