hbvdna與乙肝兩對半檢測結(jié)果的相關(guān)性探討

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1、HBVDNA與乙肝兩對半檢測結(jié)果的相關(guān)性探討【摘要】目的：探討HBVDNA的檢出情況與乙肝兩對半結(jié)果之間的關(guān)系。方法：運(yùn)用熒光定量PCR（FQPCR）檢測307例疑似乙肝患者血清中的HBVDNA，同時(shí)運(yùn)用ELISA方法進(jìn)行兩對半指標(biāo)的檢測，并對結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性探討。結(jié)果：HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)組（大三陽組）患者血清HBVDNA檢出率為98.8%（84/85），平均拷貝數(shù)為1.82E+07/ml；HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)組（小三陽組）患者血清HBVDNA檢出率為64.6%（53/82），平均拷貝

2、數(shù)為1.82E+04/ml；HBsAg(+)HBcAb(+)組血清HBVDNA檢出率為63.6%（7/11），平均拷貝數(shù)為7.94E+04/ml。結(jié)論：血清HBVDNA水平與HBVM表現(xiàn)模式有關(guān)，HBsAg（+）/HBeAg（+）/HBcAb（+）的標(biāo)本HBVDHA值顯著高于HBsAg（+）/HBeAb（+）/HBcAb（+）的標(biāo)本和HBsAg（+）/HBcAb（+）的標(biāo)本，提示HBsAg與HBeAg的存在影響HBVDNA水平。FQPCR能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量，可以檢測HBV的真實(shí)感染和復(fù)制情況，對于乙型肝炎的臨床診斷、治療方案的選擇和療效考察有較大

3、的指導(dǎo)意義。【關(guān)鍵詞】肝炎病毒；乙型；DNA；定量PCR6　　乙型肝炎病毒(HBV)感染是影響我國人民健康最重要的傳染病之一，現(xiàn)我國約有1.2億人口為HBV攜帶者［1］，HBV感染所致的慢性乙型肝炎病程遷延，有進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化或肝功能衰竭的可能，甚至于發(fā)展成肝癌，因此對HBV的檢測是較為關(guān)注的課題。我們采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測了211份臨床血清標(biāo)本，并同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）進(jìn)行對照檢測，報(bào)告如下?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1標(biāo)本來源211份臨床血清標(biāo)本來自2006年1月至2007年1月到我科作乙型肝炎血清標(biāo)志檢

4、測者標(biāo)本，根據(jù)其HBVM表現(xiàn)模式分為9組，所有標(biāo)本均為隨機(jī)抽樣?！　?.1.2儀器德國羅氏公司LightCycler熒光定量PCR儀?！　?.1.3HBVDNA定量檢測試劑盒深圳匹基生物工程技術(shù)股份有限公司出品。　　1.1.4HBVELISA檢測試劑盒廈門新創(chuàng)生物工程有限公司出品?！　?.2方法6　　1.2.1HBVDNA定量檢測采用德國羅氏公司LightCycler熒光定量PCR儀及深圳匹基生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBVDNA熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行HBVDNA定量檢測，嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說明書操作。　　1.2.2HBVM檢測采用ELIS

5、A方法檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作?！　?.2.3定量結(jié)果統(tǒng)計(jì)方法定量結(jié)果采用求對數(shù)平均值的方法計(jì)算HBVDNA的平均拷貝數(shù)，遇有陰性結(jié)果，不參與平均值的統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用配對t檢驗(yàn)?！　?結(jié)果　　2.1PCR檢測HBVDNA定量結(jié)果見表1。　　表1各HBVM表現(xiàn)模式及FQPCR檢測其HBVDNA定量結(jié)果（略）　　注：遇有陰性結(jié)果，不參與平均值的統(tǒng)計(jì)。　　2.2常見HBVM表現(xiàn)模式其HBVDNA檢測結(jié)果的比較見表2。　　表2HBV標(biāo)志物不同模式HBVDNA檢測結(jié)果（略）6　　與模式1相比P值2P＜0.013P＜0.01　　3討論　　FQ

6、PCR是進(jìn)行臨床基因診斷的有效手段，它采用了完全閉管檢測，不需要PCR后處理，避免了交叉感染；同時(shí)采用實(shí)時(shí)檢測技術(shù)，所得Ct值和原始模板數(shù)量完全呈線形相關(guān)，定量準(zhǔn)確率極高［2］，它不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于熒光探針的應(yīng)用，可以通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測PCR擴(kuò)增過程中熒光信號的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜的高精確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺點(diǎn)［3］。ELISA法檢測乙肝兩對半是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，它檢測的是人體對HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，而FQPCR則可以準(zhǔn)確的反應(yīng)出HBVDNA的復(fù)制水平、病程變化和治

7、療恢復(fù)情況等。本文結(jié)果顯示，85例大三陽組中，其HBVDNA陽性84例，檢出率達(dá)98.8%，而且呈較高的拷貝量，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理大三陽組和HBsAg(+)HBcAb(+)組及小三陽組差異有顯著性，說明這些患者HBV具有較高的復(fù)制水平，是具有傳染性的重要標(biāo)志。通過采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測，我們可以發(fā)現(xiàn)1組與2組(P＜0.01)，及1組與3組(P＜0.01)，2組與3組(P＜0.05)相比差異有顯著性，從而可知HBV6DNA的水平與HBeAg的存在有顯著的關(guān)系，與HBsAg的存在也有明顯的關(guān)系，說明HBeAg和HBsAg的存在一定程度上能反應(yīng)HBV的復(fù)

8、制程度。5組HBcAb單一陽性的標(biāo)本其HBVDNA定量檢測值雖然為陰性，但國內(nèi)學(xué)者證明［4］