大孔樹脂分離純化黃連總生物堿型號的篩選

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1、大孔樹脂分離純化黃連總生物堿型號的篩選【摘要】【目的】從眾多的樹脂型號中篩選出分離純化黃連總生物堿效果較好的一種。【方法】運用AB8、HP20、LD605、ADS3、ADS5、D151、DA201、XAD7、NKA99種樹脂，以黃連總生物堿的吸附率和解吸率為指標進行初篩，并以鹽酸小檗堿的解吸率為指標，進一步的篩選。【結(jié)果】9種樹脂中，ADS3樹脂的吸附和解吸能力均較強，總生物堿的吸附率達到9726%，解吸率達到8482%。鹽酸小檗堿的解吸量達到9311mg?！窘Y(jié)論】ADS3樹脂對總生物堿及

2、鹽酸小檗堿的吸附和解吸性能都較好，可用于黃連總生物堿的分離純化?！娟P(guān)鍵詞】黃連/分離和提純;總生物堿/分析;鹽酸小檗堿/分析;大孔樹脂黃連是毛莨科植物黃連的根莖，有效成分主要是生物堿，其中小檗堿的含量最高，可達10%左右，而且以鹽酸鹽的狀態(tài)存在于黃連中[1]。黃連中的生物堿大多是季銨型生物堿，在水中溶解度大，有一定的極性[1]。在運用大孔樹脂分離純化中藥有效成分時，樹脂的極性和所含的官能團對化合物的吸附能力有很大的影響。因此，對于中藥有效成分或有效部位的純化，樹脂型號的選擇非常重要。　　根據(jù)已有的報道，目前常

3、用于生物堿分離純化的樹脂型號有DA201、NKA9、D101、LD605、AB8、D151、XAD4、XAD7、ADS83、ADS5、HP20[2~7]。其中，D101、HP20、XAD4實為同一種樹脂。故本研究將從DA201、NKA9、LD605、AB8、D151、XAD7、ADS3、ADS5、HP209種樹脂中篩選一種分離效果較好的型號，現(xiàn)報道如下?！　?儀器與材料　　LC10ATvpplus高效液相色譜儀(日本島津)，SPD10Avpplus紫外—可見檢測器，紫外—可見分光光度計

4、(ThermoElectroncorporation)，UVmini1240紫外分光光度計。AB8、HP20、LD605、ADS3、ADS5、D151均由天津歐瑞生物科技有限公司提供，DA201、NKA9由滄州寶恩化工有限公司提供，XAD7由美國哈門羅斯公司提供，黃連藥材由北京同仁堂(毫州)飲片有限責任公司提供(經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室黃海波老師鑒定為毛莨科植物黃連CoptischinensisFranch的干燥根莖)，鹽酸小檗堿標準品(批號：110713200609)由中國藥品生物制品

5、檢定所提供?！　?方法與結(jié)果　　21黃連提取液中總生物堿的測定　　211標準曲線的繪制8　　2111檢測波長的確定分別吸取鹽酸小檗堿標準品溶液和經(jīng)適當稀釋后的黃連提取液，在200～600nm之間進行波長掃描，兩者在347nm波長處呈現(xiàn)共有吸收峰，故確定檢測波長為347nm。見圖1?！　?112標準曲線的繪制精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品1110mg，置50mL量瓶中，用005mol/LH2SO4溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液02、05、08、10

6、、15、20mL，分別置50mL量瓶中，加005mol/LH2SO4稀釋至刻度，搖勻，在347nm波長處測定吸光度。以吸光度X為橫坐標，質(zhì)量濃度Y為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明在000176～1176mg/mL范圍內(nèi)鹽酸小檗堿的濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為：Y=00162X-000004，r=09999?！　?010年第27卷廣州中醫(yī)藥大學學報212黃連提取液中總生物堿的測定稱取黃連藥材10g，加8倍量體積分數(shù)60%乙醇回流提取3次，每次1h，合并提取液。將提取液移至100

7、0mL的容量瓶中，加體積分數(shù)60%乙醇定容至刻度。取1mL樣品，置25mL量瓶中，加005mol/LH2SO4定容至刻度。取25mL上述樣品，置25mL量瓶中，加005mol/LH2SO4定容至刻度。在347nm處測吸光度為0297。采用此法提取得到的總生物堿為0119g/g藥材。8　　22大孔樹脂型號的初篩　　221供試品溶液的制備取黃連粉末100g，加8倍量的體積分數(shù)60%的乙醇，加熱回流提取3次，每次1h，合并3次提取液，過濾。濾液減壓真空濃縮至無醇味。將提取液轉(zhuǎn)移至1000mL的容量

8、瓶，加蒸餾水定容至刻度，備用。取1mL上述提取液，置于25mL的容量瓶中，用005mol/L的H2SO4定容至刻度。取上述稀釋液25mL，置于25mL的容量瓶中，用005mol/LH2SO4定容至刻度。在347nm波長下測得吸光度為0285。計算得提取液中總生物堿的濃度為1144mg/mL?！　?22樹脂的預處理根據(jù)黃連中生物堿的性質(zhì)，綜合已有的文獻報道[2～7]，從眾多的樹脂型號中選