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《(論文格式)纖維素降解菌的篩選及其發(fā)酵產(chǎn)酶條件研究(1)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、纖維素降解菌的篩選及其發(fā)酵產(chǎn)酶條件研究李瑩姝??閻淑珍（南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南京210046）摘要：纖維素酶是一種分解纖維素的高活性生物催化劑，具有廣泛的應(yīng)用價值。為了獲得高活性的纖維素降解細菌，對從南京師范大學(xué)北區(qū)枯葉堆及其附近土壤采集的樣品進行富集和剛果紅纖維素平板初篩，得到6株產(chǎn)纖維素分解酶的菌株，其中5株為細菌（B1、B3、B4、B8、B10），1株可能為真菌(B10)。經(jīng)過水解圈復(fù)篩，得到兩株產(chǎn)酶活性較高的細菌菌株B3、B10，經(jīng)過細菌形態(tài)觀察及生理生化鑒定，初步鑒定B3為革蘭氏陽性桿菌（可能為巨
2、大芽孢桿菌）、B10為革蘭氏陽性桿菌。經(jīng)過搖瓶發(fā)酵，測定其CMCase、FPA酶活力，結(jié)果表明B3和B10兩菌株分別在培養(yǎng)第三天后所產(chǎn)CMC酶的活力達到最高，分別為55.09U/mL和44.99U/mL，并且兩株菌均在培養(yǎng)基PH為8時酶活力最高。B3菌株基本沒有FPA酶活力，B10菌株在培養(yǎng)三天后FPA酶活力達到最高104.14U/mL,?？蛇M一步通過紫外誘變育種等方法提高產(chǎn)酶量及酶活性，進行進一步研究。關(guān)鍵詞：纖維素酶，微生物，篩選鑒定，酶活?????纖維素是自然界分布最廣、最豐富、最廉價的可再生性有機資源和多
3、糖物質(zhì)，隨著地球上不可再生資源日益耗竭，如何有效轉(zhuǎn)化和利用這一豐富資源，成為各國關(guān)注的重要領(lǐng)域[1]。發(fā)展和利用生物技術(shù)分解轉(zhuǎn)化天然纖維素原料，得到可利用的糖，再進一步轉(zhuǎn)化為燃料乙醇、燃氣等能源物質(zhì)或者菌體蛋白等食品，成為當(dāng)前國際研究的熱點。[2]采用微生物技術(shù)解決這一問題是當(dāng)前研究最多方法。目前研究較多的是霉菌,尤以綠色木霉、里氏木霉和康氏木霉為典型[3]?,對細菌研究較少。分離篩選能夠高產(chǎn)纖維素酶,有效降解纖維素的微生物菌種是應(yīng)用纖維素材料的首要前提，高產(chǎn)降解纖維素細菌的獲得、得到比較穩(wěn)定的菌劑及應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)
4、上,對解決當(dāng)今世界所面臨的糧食短缺、飼料資源緊張、能源危機和環(huán)境污染等問題具有深遠的意義[4]?。????土壤中的微生物，大約70%~90%是細菌。細菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表約3-8cm的土壤層。因此，土壤取樣時，一般要鏟去表層土。另外，土樣的采集要選擇富含纖維素的環(huán)境，這是因為在纖維素含量豐富的環(huán)境，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。????本實驗從腐爛枯葉附近的土壤中分離篩選能降解纖維素的細菌，通過富集，剛果紅初篩，水解圈大小復(fù)篩，測定菌株的CMC酶活力和FPA酶活力，從
5、而得到產(chǎn)纖維素酶活力較高的兩株菌，通過形態(tài)觀察、生理生化試驗初步鑒定菌種。?1材料和方法1.1菌種來源采集：綜合各種因素，本小組圖樣采集于南京師范大學(xué)仙林校區(qū)生地圖書館后的土壤。在不同的3個地點采樣。土樣1：腐爛葉下；土樣2:竹葉下；土樣3：背陽面枯葉堆。?1.2試劑與儀器DNS試劑（3，5-二硝基水楊酸），檸檬酸-磷酸鹽緩沖液（pH6~8），碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液（pH9），0.51%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC），1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。恒溫培養(yǎng)箱、恒溫烘箱，恒溫水浴鍋，控溫搖床、全自動滅菌鍋、電磁爐、微波爐
6、、離心機、精密分析天平，托盤天平，721分光光度計，20mL具塞刻度試管，20ml試管，pH計（酸度計），容量瓶，移液管（0.5mL，2mL），小口瓶、燒杯、量筒等。?1.3培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基：纖維素粉2.5g，NaNO30.5g，Na2HPO4?7H2O0.25g,KH2PO40.45g,MgSO4?7H2O0.25g,KCl0.25g,酵母粉0.25g，溶解定容至500ml；剛果紅纖維素培養(yǎng)基：纖維素粉1.88g，MgSO47H2O0.25g，K2HPO4?0.5g，剛果紅0.2g，瓊脂14.0g，明膠2g，蒸
7、餾水1000mL；剛果紅纖維素鈉培養(yǎng)基：CMC-Na10g，酵母膏1g，瓊脂15g，明膠2g，K2HPO40.5g，MgSO4?7H2O0.25g，剛果紅0.05g，蒸餾水1000mL；酶活培養(yǎng)基(g/L):CMC-Na5.0g,蛋白胨2.5g,酵母膏0.5g,MgSO4?0.3g,KH2PO4?2.0g,NaCl1.0g,(NH4)2SO4?1.4g,CaCl2?2H2O0.3g,FeSO4?7H2O0.005g,MnSO4?0.0016g,ZnC12?0.0017g,定容至1000mL,自然pH；牛肉膏蛋白胨
8、培養(yǎng)基（NA）：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，瓊脂17.0g，水1000mL，pH7.0～7.2。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂15g，自來水稀釋至1000ml。?1.4菌種的分離與純化1.4.1樣品處理目的菌富集：稱取土樣20g，在無菌條件下加入已滅菌的裝有50ml培養(yǎng)基和6顆玻璃珠的250ml錐形瓶中，將
