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《區(qū)帶毛細(xì)管電泳法測定中藥槐米中蘆丁的含量》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱：區(qū)帶毛細(xì)管電泳法測定中藥槐米中蘆丁的含量班級：化學(xué)學(xué)院10級（2）班姓名：李宴軻學(xué)號：33100218一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、初步掌握毛細(xì)管電泳法的原理2、掌握毛細(xì)管電泳儀和微波輔助萃取裝置的使用方法3、掌握中草藥定量分析的基本過程及方法二、實(shí)驗(yàn)原理毛細(xì)管電泳法(CE)，又叫高效毛細(xì)管電泳（HPCE）。CE統(tǒng)指以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù)。圖1、高效毛細(xì)管電泳儀示意圖毛細(xì)管電泳的突出特點(diǎn)是：a、毛細(xì)管電泳的儀器
2、簡單、操作簡便，容易實(shí)現(xiàn)自動化b、分析速度快，分析效率很高c、操作模式多，分析方法開發(fā)容易d、實(shí)驗(yàn)成本低、消耗少e、應(yīng)用范圍極廣三、儀器及試劑1、儀器高效毛細(xì)管電泳儀微波消解系統(tǒng)色譜工作站臺式離心機(jī)1、試劑槐米，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，無水乙醇，硼砂，NaOH,二次蒸餾水一、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品溶液制備草藥槐米經(jīng)烘干、粉碎，過40目標(biāo)準(zhǔn)篩。準(zhǔn)確稱取0.10g粉末于微波消解罐的內(nèi)套中，加入10mL乙醇，將內(nèi)套放入消解罐外套中，整個消解罐在密閉的狀態(tài)下置于微波萃取裝置中，在控制溫度100C°的條件下，萃取2min。萃取結(jié)束
3、后，待消解罐冷卻至室溫后開罐，萃取液經(jīng)過抽濾出去固體后，用無水乙醇定容至25mL。2、緩沖溶液配置（1）準(zhǔn)確稱取Na2B4O7·10H2O固體9.5343g，在100mL的燒杯中用二次水溶解（需水浴加熱），待固體全部溶解并冷卻至室溫后，定容至250mL，即得到0.1ml/L的Na2B4O7溶液。（2）用移液器取0.1mol/L的Na2B4O7溶液200μL用二次水稀釋配置成10mmol/L的溶液2mL，稀釋兩份，置于2mL離心管中，用作電泳緩沖溶液。3、毛細(xì)管電泳儀的操作要領(lǐng)（1）開機(jī)預(yù)熱20min。使
4、用前須依次用二次水沖洗5min，0.1mol/LNaOH溶液沖洗5min，二次水沖洗5min（2）設(shè)定工作溫度25C°。（3）每次電泳前，須用二次水沖洗2min，再用0.1mol/LNaOH溶液，二次水沖洗2min，再用緩沖溶液沖洗2min。（4）本實(shí)驗(yàn)的進(jìn)樣條件為0.5psi壓力，10s時間。（5）電泳運(yùn)行條件為20KV，20min，在啟動高壓的同時，色譜工作站的記錄系統(tǒng)也觸發(fā)開始。（6）電泳結(jié)束后，在計(jì)算機(jī)的色譜工作站軟件內(nèi)保存好色譜圖，記錄峰面積。（7）實(shí)驗(yàn)結(jié)束對儀器進(jìn)行沖洗，依次用二次水沖洗2m
5、in，0.1mol/LNaOH溶液沖洗2min，二次水沖洗2min，0.1mol/LNaOH溶液沖洗5min，二次水沖洗5min，0.1mol/LNaOH溶液沖洗10min，二次水沖洗10min。4、槐米中蘆丁含量測定（1）取槐米樣品溶液200μL，置于2mL離心管中，加入40μL的0.1ml/L的Na2B4O7溶液和1760μL二次水，扣緊離心管蓋子，搖勻并在離心管上做標(biāo)記。（2）將裝有配置好的樣品溶液和緩沖溶液的2mL離心管放入離心機(jī)中，在4000rpm的轉(zhuǎn)速下離心脫氣5min。（3）離心后得到10
6、mmol/L的Na2B4O7溶液即為本實(shí)驗(yàn)的運(yùn)行緩沖溶液，做標(biāo)記的樣品溶液即為電泳儀可檢測的樣品溶液。（4）照前述電泳條件測定該樣品溶液，得到譜圖保存并打印。一、數(shù)據(jù)處理1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=97+2099X(μg/mL)2、從待測樣品譜圖中，根據(jù)峰保留時間確定蘆丁峰，記錄該峰的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得對應(yīng)的濃度值。經(jīng)過計(jì)算得出中藥槐米中的蘆丁質(zhì)量百分含量。根據(jù)待測樣品譜圖和蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)電泳曲線的對比，得出蘆丁峰的保留時間9.650s，該峰的峰面積為31811。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=97+
7、2099X(μg/mL)得出待測樣品中蘆丁的濃度為Y=15.11（μg/mL），計(jì)算得到樣品中蘆丁的質(zhì)量為3.777mg，由于我們所取的槐米的樣品質(zhì)量為0.1015g，因此計(jì)算得到中藥槐米中的蘆丁質(zhì)量百分比為3.721%二、思考題1、簡要說明毛細(xì)管電泳法（CE）同液相色譜法（LC）的區(qū)別與聯(lián)系。答：CE和HPLC相比,其相同處在于都是高效分離技術(shù),操作均可自動化,且有多種不同分離模式。差異在于：（1）CE用遷移時間取代HPLC中的保留時間,CE的分析時間通常不超過30min,比HPLC速度快；其他分離存
8、在兩相，電泳是均相。（2）對CE而言,理論塔板高度和溶質(zhì)的擴(kuò)散系數(shù)成正比,對擴(kuò)散系數(shù)小的生物大分子而言,其柱效高。（3）CE所需樣品為nl級,最低可達(dá)270fl,流動相用量也只需幾毫升,而HPLC所需樣品為μl級,流動相則需幾百毫升乃至更多；但CE僅能實(shí)現(xiàn)微量制備,而HPLC可作常量制備。2、進(jìn)入毛細(xì)管電泳儀的溶液，為什么必須經(jīng)過離心脫氣這一步驟？如果沒有脫氣，將會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生什么樣的影響？答：在多數(shù)的水溶液中，石英（或玻璃）毛細(xì)管表面因
