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《實(shí)時(shí)FQ－PCR與時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)乙型肝炎分析.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、實(shí)時(shí)FQ－PCR與時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)乙型肝炎分析作者：薄紅霞馮育英韓紅燕劉佳摘要目的：探討實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)定量檢測(cè)乙型肝炎病毒(HBV-DNA)與時(shí)間分辨熒光免疫分析法對(duì)乙型肝炎免疫標(biāo)志物(HBV-M)檢測(cè)對(duì)乙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷的敏感性。方法：采用兩種方法分別對(duì)800例本院傳染科住院及門診可疑病人血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：用FQ-PCR檢測(cè)800例，HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)602，陽(yáng)性率87.81%，用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)800例，HBV-M的陽(yáng)性例數(shù)477，陽(yáng)性率59.63%，通過χ２檢檢，χ２=2.98，P<0.05。結(jié)論：在乙型肝炎的實(shí)驗(yàn)
2、室診斷中，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)乙型肝炎病毒HBV-DNA更優(yōu)于時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)乙型肝炎免疫標(biāo)志物HBV-M?！ ￡P(guān)鍵詞乙型肝炎；聚合酶鏈反應(yīng)；時(shí)間分辨熒光免疫分析 乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)是嚴(yán)重危害人類健康的病毒之一，HBV感染后參考血清免疫學(xué)標(biāo)志物如HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb(即乙肝兩對(duì)半；HBV-M)等，它們的敏感性及特異性可滿足一般臨床應(yīng)用。但近幾年研究發(fā)現(xiàn)由于一些HBV變異株的出現(xiàn)導(dǎo)致臨床部分患者的HBV感染復(fù)制狀況難以判斷，甚至漏檢。定量PCR檢測(cè)HBV-DNA可對(duì)乙肝患者體內(nèi)HBV復(fù)制有更直接的了解，
3、亦有利于臨床對(duì)HBV感染的診斷、治療方案的選擇及療效判定。本實(shí)驗(yàn)采用熒光定量PCR(FQ-PCR)和時(shí)間分辨兩種方法同時(shí)檢測(cè)了800份肝炎患者血清，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比觀察，現(xiàn)報(bào)告如下?！ ?材料和方法 1.1材料 1.1.1研究對(duì)象： 為2005年10月～2005年12月本院傳染科住院及門診病人800例?！ ?.1.2試劑與儀器： 實(shí)時(shí)FQ－PCR試劑盒購(gòu)自中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。DNA擴(kuò)增儀為美國(guó)產(chǎn)ABI7000。時(shí)間分辨熒光免疫分析法試劑盒購(gòu)自上海新波技術(shù)有限公司，HBV－M儀器為上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的時(shí)間分辨熒光免疫分析?！ ?.2方法 1.2.1
4、標(biāo)本采集與保存： 3 無(wú)菌抽取受檢者靜脈血2mL，8,000rpm離心5min，吸取上清（注意勿帶入紅細(xì)胞）。標(biāo)本可立即用于測(cè)試，也可保存于-20℃待測(cè)。 1.2.2標(biāo)本的處理和DNA的提?。骸 ∪⊙鍢?biāo)本50μL，加等量DNA提取液打勻，恒溫金屬浴10min(誤差不超過1min)。10,000rpm離心5min，取上清液5μL做PCR反應(yīng)?！ ?.2.3標(biāo)準(zhǔn)品稀釋和處理：嚴(yán)格按照HBV-DNAFQ-PCR試劑盒說明書將陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋和處理，最后與標(biāo)本一同點(diǎn)樣上機(jī)?！ ≡O(shè)置PCR程序?yàn)?3℃2min預(yù)變性，然后按93℃45s→55℃60s，先做10個(gè)循環(huán)，最后按
5、93℃30s→55℃45s，做30個(gè)循環(huán)，所有檢測(cè)均由同批檢測(cè)人員進(jìn)行操作及分析?！ ?結(jié)果 HBV-DNA定量測(cè)量結(jié)果：800例肝炎患者血清標(biāo)本中，350例HBV-DNA陽(yáng)性，450例陰性，陽(yáng)性最低滴度為2.74×103copies/mＬ，最高滴度為8.73×108copies/mＬ。其中乙肝大三陽(yáng)組HBV-DNA檢出率為95.83％；乙肝小三陽(yáng)組HBV-DNA檢出率為43.48％；HBsAg、HBcAb(+)組HBV-DNA檢出率高達(dá)40.00％；所有HBsAb(+)組均未檢出HBV-DNA；HBV-M全陰組HBV-DNA檢出率為2.17％。見表1～表3。表1用FQ-PCR檢
6、測(cè)病人HBV-DNA的結(jié)果HBV-DNA定量測(cè)定值范圍（略）注：試劑盒的檢測(cè)下限<103為陰性。表2用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)病人HBV-M的結(jié)果（略）表3兩種方法對(duì)乙型肝炎患者血清標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果比較（略） 3討論 通過上述兩種方法對(duì)800例臨床血清標(biāo)本的檢測(cè)，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)HBV-DNA的陽(yáng)性檢出率87.81%,用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)HBV-M的陽(yáng)性檢出率59.63%,兩種方法的χ2檢驗(yàn),P<0.05,說明兩種方法對(duì)乙型肝炎病毒的檢測(cè)有明顯的差異。 在216例乙肝大三陽(yáng)患者血清中檢出HBV-DNA陽(yáng)性207例，檢出率達(dá)95.83％，定量結(jié)果在1.82×1
7、06copies/mＬ～8.73×108copies/mＬ之間，說明“大三陽(yáng)”與HBV-DNA是有顯著相關(guān)的。但是，不同個(gè)體病毒復(fù)制程度差異較大，其中有9例HBeAg陽(yáng)性但HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果陰性，這9例服用拉米夫啶進(jìn)行抗病毒治療者，使HBeAg陰轉(zhuǎn)明顯滯后，所以“大三陽(yáng)”與HBV-DNA并不能劃上等號(hào)，在抗病毒治療過程中，兩者均獲得轉(zhuǎn)陰，可認(rèn)為抗病毒治療療效顯著；如果其中一項(xiàng)陰轉(zhuǎn)，則說明有效，但仍需繼續(xù)抗病毒治療，直到兩項(xiàng)病毒指標(biāo)都轉(zhuǎn)陰為止。故雖然HBeAg(
