資源描述：
《新型時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測水產(chǎn)致病菌》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校編碼10390分類號081學(xué)號201211710006密級碩士學(xué)位論文新型時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測水產(chǎn)致病菌指導(dǎo)教師：林鵬教授作者姓名：顧宏杰串請學(xué)位級別：碩士科專業(yè)：生物學(xué)研究方向：-生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文提交曰期：2015年04月07日論文答辯日期-2015年06月09日學(xué)位授予單位：集美大學(xué)學(xué)位授予曰期：2015年06月答辯委員會主席：謝潮添教授論文評閱人:學(xué)術(shù)誠信聲明茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。除文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果
2、。本人依法享有和承擔(dān)由此論文產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。聲明人（簽名hi時(shí)間：廁保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解集美大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查鬩和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意集美大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。作者（簽名）：導(dǎo)師（簽名）：^時(shí)間：別夂碩士學(xué)位論文新型時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測水產(chǎn)致病菌NewTime-resolvedFluoroimmunoassayforPathogenicBacteriainAquacul
3、ture學(xué)科門類：理學(xué)作者姓名：顧宏杰指導(dǎo)教師：林鵬教授專業(yè)名稱：生物學(xué)研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)位授予單位：集美大學(xué)論文答辯日期：2015年06月09日新型時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測水產(chǎn)致病菌摘要我國是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，養(yǎng)殖規(guī)模位居世界前列。但目前的高密度集約化養(yǎng)殖使得病害發(fā)生日益頻繁，尤以細(xì)菌病最為嚴(yán)重，傳統(tǒng)的熒光抗體法、酶聯(lián)免疫分析法均存在背景熒光較高，靈敏度低等缺陷，時(shí)間分辨熒光免疫分析法作為一種高靈敏的檢測方法已在食品、化學(xué)等領(lǐng)域引起重視；課題組首次應(yīng)用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測了產(chǎn)酸克雷伯氏菌，我們在此基礎(chǔ)上探索了TRF
4、IA檢測致病菌的新方法，主要內(nèi)容如下：1.建立了雙標(biāo)記TRFIA檢測嗜水氣單胞菌B18和產(chǎn)酸克雷伯氏菌B12，將致病菌直接包3+3+被微孔板，Eu-IgG、Sm-IgG作為檢測抗體對其進(jìn)行檢測，嗜水氣單胞菌B18和產(chǎn)6酸克雷伯氏菌B12檢測靈敏度均為1.0×10cfu/mL，靈敏度較低存在很大的可拓展空間。2.為了進(jìn)一步提高檢測靈敏度，將抗嗜水氣單胞菌B18抗體和抗產(chǎn)酸克雷伯氏菌B12抗體包被微孔板，建立了嗜水氣單胞菌B18和產(chǎn)酸克雷伯氏菌B12的雙抗夾心雙標(biāo)記3+3+TRFIA法，通過對包被IgG、Eu-IgG及Sm-IgG進(jìn)行優(yōu)化產(chǎn)酸
5、克雷伯氏菌B12的檢44測限達(dá)到1.0×10cfu/mL，嗜水氣單胞菌B27的檢測限為6.0×10cfu/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線47在1.0×10-1.0×10cfu/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)99%以上，均優(yōu)于目前常用的熒光抗體法及ELISA法，且特異性好、重復(fù)性好、亦可用于實(shí)際樣品檢測。3.利用生物素標(biāo)記抗嗜水氣單胞菌抗體，堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素與其發(fā)生特異反應(yīng)后，先后加入反應(yīng)底物二氟苯水楊酸酯，在酶催化作用下，反應(yīng)產(chǎn)物能夠與3+Tb-EDTA生成時(shí)間分辨熒光溶液，以此建立的酶放大時(shí)間分辨熒光分析法檢測嗜水26氣單胞菌B18。標(biāo)準(zhǔn)曲線
6、在1.0×10-1.0×10cfu/mL范圍內(nèi)線性良好，該方法的靈敏2度為1.0×10cfu/mL，優(yōu)于雙抗夾心雙標(biāo)記時(shí)間分辨熒光免疫分析法，且特異性好，重復(fù)性好，可用于實(shí)際樣品檢測。4.本課題組先期已合成出新型螯合劑DTPA-pAS，但直接與抗體標(biāo)記，靈敏度較低；本研究在此基礎(chǔ)上，通過多聚賴氨酸改進(jìn)標(biāo)記比，建立了檢測嗜水氣單胞菌B18的TRFIA5法，靈敏度為1.0×10cfu/mL。關(guān)鍵詞：時(shí)間分辨熒光免疫分析；酶放大時(shí)間分辨熒光；嗜水氣單胞菌；產(chǎn)酸克雷伯氏菌；稀土螯合物INewTime-resolvedFluoroimmunoass
7、ayforPathogenicBacteriainAquacultureAbstractTheaquacultureisadvancedinChina.Itsscaleisamongthehighestintheworld.Theinfectionofpathogenicbacteriathatcausesmassivedeathofaquaticanimalsisapressingproblemforaquaculture.Thecommonlyusedflorescentantibodyandenzyme-linkedimmunoso
8、rbentassaysufferfromhighbackgroundfluorescenceandlowsensitivity.Time-resolvedfluoroimmunoassay(T
