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《時間分辨熒光免疫分析法測定HBsAg-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、150世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘2014年第14卷第24期·醫(yī)學(xué)檢驗·時間分辨熒光免疫分析法測定HBsAg徐秋萍(黑龍江省江濱農(nóng)場醫(yī)院，黑龍江鶴崗154243)摘要：目的探討時間分辨熒光免疫分析法檢測乙型肝炎表面抗原rHBsAg)的方法。方法總結(jié)采用ELISA法測定病人血清標本的HBsAg的方法和結(jié)果。結(jié)論采用TRFIA法定量檢測HBsAg靈敏度更高，線性范圍更寬，在低濃度標本檢測中更具優(yōu)勢，更具有臨床意義。關(guān)鍵詞：時間分辨熒光免疫分析技術(shù)；測定：HBsAg中圖分類號：R446．6文獻標識碼：BDOI：10．39
2、69d．issn．1671．3141．2014．24．1l01原理6操作程序，采用雙抗體夾心時間分辨免疫熒光分析法fIFMA法)。6．1試劑的準備以單克隆抗一HBs抗體包被反應(yīng)板，用銪標記試劑(DTTA—Eu16．1．1洗滌液：將40ml濃縮洗液和960ml去離子水在標記抗一HBs。加入待測樣本后，樣本中的HBsAg與包被于干凈的洗液瓶中混合，作為工作洗滌液備用。微孔板上的單克隆抗體結(jié)合，洗滌后加入銪標記的抗一HBs—6．1．2銪標記物：使用前1h內(nèi)用銪標記稀釋液按1：DTTA—Eu，與已結(jié)合在板上的HBs
3、AG反應(yīng)，在微孔表面形5O倍稀釋，并一次用完(使用一次性的塑料容器來配制)。成抗一HBs—HBsAg一抗一HBs—DTTA—Eu復(fù)合物。洗滌去除6．2將試劑及所需數(shù)量的微孔反應(yīng)條置室溫游離的銪標記抗一HBs，加入增強液(B—NTA)將復(fù)合物上(20—25℃，下同)平衡。的Eu3+解離到溶液中，并與增強液中的有效成分形成高熒6．3吸取100l陰性、陽性對照及待檢樣本，按順序光強度的螫合物，其熒光強度與樣本中的HBsAg濃度成正加入微孔中并加貼封片。比。通過測定熒光強度，可測定血清樣本中的HBsAg。6．4微孔
4、反應(yīng)條在室溫下，用振蕩儀緩慢振搖孵育40rain。2標本采集6．5在第一次孵育結(jié)束后，小心將微孔反應(yīng)條上的封2．1樣品采集片揭下并棄掉，將微孔反應(yīng)條放入洗板機吸干各孔并每孔采集新鮮無抗凝靜脈血2—3ml，采用離心法分離出血注入洗滌液400l，再吸干各孔，重復(fù)以上洗滌4次，最清。血清樣本2～8qC可保存6d，一20qC可長期保存。避免后一次將微孔反應(yīng)條拍干。反復(fù)凍融。6．6每孔中加入100l銪標記物工作液，并加貼封片。2．2注意事項6．7微孔反應(yīng)條在室溫下，用振蕩儀緩慢振搖孵育由于EDTA、檸檬酸鹽會與銪發(fā)生
5、螯合反應(yīng)，因此，不40rain。能使用含有這些物質(zhì)抗凝的血漿，但可以使用肝素抗凝血6．8第二次孵育結(jié)束后，小心將微孔反應(yīng)條上的封片漿。揭下并棄掉，將微孔反應(yīng)條放人洗板機吸于各孔并每孔注3試劑入洗滌液400l，在吸干各孔，重復(fù)以上洗滌6次，最后3．1試劑來源：蘇州新波生物技術(shù)有限公司提供的乙一次將微孔反應(yīng)條拍干。型肝炎病毒表面抗原定量檢測試劑盒(時間分辨免疫熒光分6．9每孔中加入增強液100l(加樣過程中避免碰到小析法1?？走吘壔蚱渲械脑噭?，盡量避免污染)，并加貼封片。3．2試劑組成：HBsAg校準品A—F各
6、1瓶(1．5ml／瓶)；6．10微孔反應(yīng)條在室溫下，用振蕩儀輕搖5rain(在銪標記物1瓶(0．2m1)，使用前按需求量做1：50倍稀釋；30min內(nèi)完成測定1。濃縮洗液l瓶(40ml1，使用前去離子水按l：25倍稀釋；銪7質(zhì)量控制標記稀釋液1瓶(20m1)；微孔反應(yīng)板1塊(12孔×8條，包7．1濃度：>150ng／ml的血樣標本應(yīng)稀釋后重新計被有抗一HBs的單克隆抗體)；增強液1瓶(20m1)。算濃度值，稀釋后濃度值應(yīng)在線性范圍內(nèi)。3．3試劑保存：28℃可保存至瓶上標簽所示的失效7．2質(zhì)控品于2～8℃保存
7、，開封后需在1周內(nèi)用完。期，增強液于28℃可保存至瓶上標簽所示的失效期，室使用前需置室溫20min，并充分振蕩、搖勻。溫f2025)下可保存6個月，避免陽光直射；使用前試7．3質(zhì)控檢測完成后，在《ANYTEST時間分辨熒光分劑各組分應(yīng)平衡至室溫，用后立即保存于2—8℃。析室內(nèi)質(zhì)控記錄表》上登記質(zhì)控記錄；參照Leveyjennings3．4質(zhì)控品：由衛(wèi)生部臨檢中心或廣東省臨檢中心質(zhì)控圖控制，發(fā)現(xiàn)失控時填寫失控報告，查出失控原因并提供。每瓶質(zhì)控品千粉用5ml蒸餾水稀釋，室溫放置做相應(yīng)的處理。15—20min，吸
8、樣前輕輕搖勻數(shù)遍保證完全混勻。未開啟的7．4A值計數(shù)值應(yīng)<5000，F(xiàn)點計數(shù)值<1000000，質(zhì)控品于28℃保存至瓶上標簽所示的失效期，復(fù)溶后密劑量反映曲線的線性關(guān)系系數(shù)R值應(yīng)>0．9800，否則應(yīng)重新封置2—8℃可保存10d，分裝后一18一一20℃保存3個月。進行實驗；實驗應(yīng)符合典型的劑量一反應(yīng)曲線，否則也應(yīng)4儀器性持續(xù)半年或1年以上為HBV慢性攜帶者，母嬰傳播可攜上海新波生物技術(shù)有限公司ANYTEST200
