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《洗滌冰凍紅細(xì)胞方法的研究.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、洗滌冰凍紅細(xì)胞方法的研究作者：孫迪，楊建 吳曉黎，劉祥忠，林艷華，陳新玲，徐明華【摘要】目的探討冰凍保存紅細(xì)胞采用三種洗脫方法，比較其對紅細(xì)胞回收率影響，為臨床應(yīng)用提供質(zhì)量依據(jù)。方法對（-70±5）℃保存6年的10份冰凍紅細(xì)胞，解凍后采用三種洗脫方法處理紅細(xì)胞，采用氰化法測定血紅蛋白，并根據(jù)容量計(jì)算出洗滌前后各袋血紅蛋白的總量，計(jì)算出紅細(xì)胞回收率。結(jié)果用方法一洗脫紅細(xì)胞,回收率明顯高于其他兩種方法，方法二回收率低于標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論方法一先離心法，紅細(xì)胞回收率明顯高于其他兩種方法?！娟P(guān)鍵詞】冰凍保存；回收率；洗脫自1949年英國學(xué)者Polge發(fā)現(xiàn)了甘
2、油的低溫保護(hù)作用以來，血細(xì)胞冰凍保存技術(shù)取得了較快的發(fā)展并逐步應(yīng)用于臨床。在深低溫狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的新陳代謝減慢甚至停滯（-65℃），血細(xì)胞可貯存較長時(shí)間。但細(xì)胞在降溫、復(fù)溫過程中，會(huì)對細(xì)胞造成冷凍損傷，必須加入一些保護(hù)劑或采用一些特殊的技術(shù)手段，以維護(hù)血細(xì)胞的外形和生理功能。筆者對（-70±5）℃保存6年的10份冰凍紅細(xì)胞解凍后，采用三種洗脫方法處理紅細(xì)胞，比較其對冰凍紅細(xì)胞回收率影響，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法1.1材料CPD-A抗凝全血400ml；紅細(xì)胞冷凍保護(hù)劑：57%甘油、3%乳酸鈉、0.2%磷酸氫二鈉、0.03%氯化鉀；三珠空袋；9%
3、氯化鈉溶液（北京博德桑特輸血器材科技開發(fā)中心）；0.9%氯化鈉溶液（山東齊都藥業(yè)）；羥乙基淀粉40氯化鈉（山東長富潔晶藥業(yè)有限公司）。1.2儀器無菌導(dǎo)管連接機(jī)（德國費(fèi)森尤斯中國投資公司）；大容量離心機(jī)（德國）；平板式離心機(jī)（德國）；恒溫水浴箱（蘇州市醫(yī)用儀器廠）。1.3血樣的采集和處理將無菌采集全血濾白后,離心去除上層血漿得到濃縮紅細(xì)胞制劑。通過無菌導(dǎo)管連接濃縮紅細(xì)胞制劑袋分成二份轉(zhuǎn)移至三珠無菌空袋內(nèi)，每單位血液加入160ml紅細(xì)胞冷凍保護(hù)液，由慢到快，逐漸提高滴速，并使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態(tài)，血袋內(nèi)有玻璃珠，起攪拌作用，讓甘油緩慢均
4、勻的和紅細(xì)胞混合。滴加完畢后，室溫靜置30min,使甘油充分進(jìn)入細(xì)胞。將甘油化的紅細(xì)胞制劑平整地放入紙盒，移入專用深低溫冰箱［（-70±5）℃］內(nèi)冰凍保存。1.4解凍融化將冰凍的紅細(xì)胞從專用深低溫冰箱（-65℃）中取出，迅速浸入37℃水浴箱中，不斷搖動(dòng)使血袋與水充分接觸，加速其融化。但不能用力去擠壓血袋，減少紅細(xì)胞在融化過程中的機(jī)械損傷，融化好的血袋要在室溫靜止10min，讓紅細(xì)胞得到充分休息，增強(qiáng)細(xì)胞的抗破壞能力。完全融化至袋內(nèi)無冰晶，時(shí)間為4~6min。31.5洗滌去甘油待冰凍紅細(xì)胞制劑完全融化后,進(jìn)入凈化間將冰凍紅細(xì)胞直接用無菌一針一通
5、管連接,甘油化的紅細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境是高滲的，為防止紅細(xì)胞遭到人為破壞，一般采用梯度洗滌法。方法一：先離心。將血袋內(nèi)甘油液分出,加9%氯化鈉液80ml,靜置5min后,加0.9%氯化鈉液400ml。離心去除上清液，加0.9%氯化鈉液500ml。離心去上清液加0.9%氯化鈉至連袋240ml。方法二：1u紅細(xì)胞加入9%氯化鈉液80ml,6%羥乙基淀粉100ml,靜置5min后，加6%羥乙基淀粉100ml。離心去除上清液，加0.9%氯化鈉液500ml。離心去上清加0.9%氯化鈉液至連袋240ml。方法三：1u紅細(xì)胞加9%氯化鈉液80ml,靜置5min后，
6、加0.9%氯化鈉液400ml。離心去除上清液，加0.9%氯化鈉液500ml。離心去上清加0.9%氯化鈉液至連袋240ml。1.6檢測標(biāo)準(zhǔn)我國冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞回收率為≥80%［1］。1.7測定方法計(jì)算紅細(xì)胞回收率。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示,方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果紅細(xì)胞低溫保存［（-70±5）℃］6年后，方法一洗脫紅細(xì)胞,回收率明顯高于其他兩種方法，方法二回收率低于標(biāo)準(zhǔn)（表1）。表1三種方法洗脫紅細(xì)胞回收率結(jié)果注：F=1371.4，P＜0.05。方法一與方法三比較，t=7.94,P＜0.013討論煙
7、臺(tái)市中心血站于2001年開始將冰凍解凍紅細(xì)胞制劑應(yīng)用于臨床,并對長期保存冰凍紅細(xì)胞保存效果進(jìn)行研究,現(xiàn)對6年低溫保存的冰凍紅細(xì)胞解凍后,檢測其各項(xiàng)指標(biāo)、平均值均符合國家規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］。本實(shí)驗(yàn)對三種方法進(jìn)行比較，其中方法一與另兩種方法比較,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冰凍保存紅細(xì)胞是目前唯一能夠使紅細(xì)胞保存時(shí)間最長的方法。甘油是目前冰凍保存紅細(xì)胞最為常用的保護(hù)劑，可減少冰晶對紅細(xì)胞的機(jī)械損傷和滲透壓改變引起的化學(xué)損傷。在減少溶血率、提高紅細(xì)胞回收率方面起重要作用［2］。有文獻(xiàn)報(bào)道在甘油化前將紅細(xì)胞與甘油充分混合可以降低其冰凍損害，從而獲得理想的
8、紅細(xì)胞回收率［3］。在甘油化時(shí)為避免損傷紅細(xì)胞,注意滴加紅細(xì)胞低溫保護(hù)劑應(yīng)緩慢均勻,以使甘油充分?jǐn)U散,滲透入紅細(xì)胞。冰凍保存時(shí)應(yīng)將血袋內(nèi)的空氣全部排空,縮小體積，加
