！納豆激酶研究進(jìn)展

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1、安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，JournalofAnhuiAgri．Sei．2011，39(7)：3821—3823，3830責(zé)任編輯喬利利責(zé)任校對馬君葉納豆激酶研究進(jìn)展敬俊鋒，陳斌，李瑩，何正波(重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，重慶高校生物活性物質(zhì)工程研究中心，重慶高校動物生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400047)摘要對納豆激酶的理化性質(zhì)、基因與蛋白結(jié)構(gòu)、納豆激酶基因的克隆與表達(dá)及體外溶栓活性測定方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并對納豆激酶的發(fā)展前景進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞納豆激酶；結(jié)構(gòu)；克隆表達(dá)；活性測定；展望中圖分類號S183文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517—6611(2011)07-03821一o

2、3CurrentResearchProgressofNattokinaseJINGJun-fengetal(InstituteofEntomologyandMolecularBiology，EngineeringResearchCenterofBioactiveSubstancesofChongqing，EngineeringResearchCenterofBioactiveSubstanceBiotechnologyofEducationMinistry，ChongqingNormalUniversity，Chongqing400047)AbstractThe

3、nattokinasenature，genesandproteinstructure，thecloningandexpressionofnattokinaseandthedeterminationofvitrofi·brinolyticactivitvarediscussedinthisPaDer．AndthedevelopmentprospeetofnattokinaseiSexpiredintheend．KeywordsNattokinase：Structure；Cloneexpression；Fibrinolyticactivity；Prospective

4、心腦血管疾病是人類健康和生命的最大威脅之一，目前FP、Neguvon卻能完全抑制其活性。NK最敏感的底物是采用溶栓酶治療心腦血管疾病是有效途徑之一。納豆激酶血漿纖溶酶底物H—D-Val—Leu—Lys—pNA(S-2251)?，發(fā)生作(Nattokinase，NK)是一種由納豆菌或納豆枯草桿菌產(chǎn)生的堿用時(shí)，首選酶切位點(diǎn)在Leul5一Tyrl6，其次在Ser9一Hisl0，在性絲氨酸蛋白酶。日本的Sumi等?于1987年首次從日本Gln4一His5及His5一Leu6也有微弱的水解活性，但納豆激酶對傳統(tǒng)食品納豆中發(fā)現(xiàn)并命名。納豆激酶具有很強(qiáng)的纖溶活氧化型胰島素B鏈

5、C端Tyrl6～Ala30的肽段卻無任何酶切性，能直接作用于纖溶蛋白，也能激活體內(nèi)纖溶酶原。與其特性j。因此，使用納豆激酶作為溶栓藥物，可避免其他溶他溶栓類藥物相比，NK具有安全性好、成本低、纖溶活性強(qiáng)、栓酶類引起的出血反應(yīng)?？煽诜⒆饔脮r(shí)間長等優(yōu)點(diǎn)，正作為一個(gè)開發(fā)預(yù)防和治療血2納豆激酶的基因與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)栓藥物的研究熱點(diǎn)，有望被開發(fā)為新一代的口服抗血栓藥物1992年Nakamura等采用鳥槍法首次克隆并分析了用于血栓性疾病的預(yù)防和治療。國內(nèi)外許多學(xué)者對納NK包括調(diào)控序列在內(nèi)的全基因序列。該基因全長1473bp，豆激酶進(jìn)行了研究，在納豆激酶的理化特性和基因工程方面

6、以GTG為起始密碼子，隨后是由1143bp組成的開放閱讀框都取得了很大進(jìn)展?；诖?，筆者就納豆激酶的理化性質(zhì)、架。其結(jié)構(gòu)基因的3末端是3個(gè)連續(xù)的終止密碼子TAA、基因與蛋白結(jié)構(gòu)、克隆表達(dá)研究、體外溶栓活性試驗(yàn)及發(fā)展TAG和TAA，轉(zhuǎn)錄終止序列為：TAAAAAGAAGCAGGTYC-前景等方面進(jìn)行了綜述，旨在為進(jìn)一步研究納豆激酶基因工CTCCATACCTGCTFCTITFA，位于成熟蛋白區(qū)域C端下游7程奠定基礎(chǔ)。bp處，該段終止序列可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，即P因子非依賴性終1理化性質(zhì)止序列。起始密碼子上游一17～11bp位點(diǎn)為核糖體結(jié)合位NK無臭味，干粉呈白色或淡黃色，在

7、280nnl波長處有點(diǎn)s．D序列：AAAGGAG。S-D序列上游是A／T含量高達(dá)吸收峰。由基因DNA序列推出其氨基酸序列，算出該酶的72％的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域，在核糖體同mRNA結(jié)合過程中起重要準(zhǔn)確分子量為27．728×10，PI值為8．6±0．3。在室溫pH值作用。5～11范圍內(nèi)活性穩(wěn)定，最適酶反應(yīng)pH值為8。低溫對其活許多研究者根據(jù)NK基因的DNA序列推出其氨基性影響不大，超過50℃活性逐漸喪失，超過60℃活性迅速酸序列的l級結(jié)構(gòu)，純化的納豆激酶在SDS-PAGE凝膠上，失去，最適反應(yīng)溫度為45℃。有機(jī)物如甘油、丙二醇、牛只顯示出1條帶，說明納豆激酶是一單鏈多肽酶

8、。也有研究血清蛋白、明膠