β甘露聚糖酶高產(chǎn)菌株選育及產(chǎn)酶條件的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)萬方數(shù)據(jù)誓霍蓄蠶譬雷譬冒!塑旦型里墮堡堅!絲!叢!Q墮!墮望墮翌墨!墜l將保藏的數(shù)十株曲霉菌株于篩選培養(yǎng)基A上進(jìn)行初篩(30℃，84h)，G一甘露聚糖酶酶活在450IU儋(干曲)以上的有4株，分別于篩選培養(yǎng)基A和B上進(jìn)行復(fù)篩(30℃，84h)，結(jié)果見表1。由1表可見，YL一01菌株產(chǎn)B一甘露聚糖酶酶活力高，故選擇YL一01作為誘變出發(fā)菌株。表1四株菌株復(fù)篩結(jié)果2．2YL．01菌株的誘變育種2．2．1初次誘變結(jié)果以YL一01為出發(fā)菌株，紫外線照射2～4min，致死率為83．5％～97．9％，誘變處理后的孢子懸液涂布豆芽汁平板。從不同誘變處理劑量挑取100株生長旺盛的

2、單菌落接入篩選培養(yǎng)基B中，1株1瓶初篩，結(jié)果見表2。表2紫外線照射初篩結(jié)果選取10株變異幅度較大的正突變菌株，于篩選培養(yǎng)基B中1株3瓶復(fù)篩，結(jié)果見表3。由表3可見，菌株YL一01—7酶活高達(dá)1531IU儋(干曲)，是二輪篩選中酶活最高者，故以后以該菌株作進(jìn)一步試驗。表3紫外線照射復(fù)篩結(jié)果菌株編號／IU．暑髯曲)菌株編號／IU善髯曲)YL一01—69973YL一01—71531YL—01．731072YL一01—161351YL．01—391127YL一01．301065YL一01—85967YL一01．261369YL—01—531247YL—01—4211432．2．2

3、再次誘變結(jié)果以YL一01—7作為再次誘變的出發(fā)菌株，參照第1次誘變和篩選方法進(jìn)行。最終篩選到1株高產(chǎn)菌株YL一01—78，酶活達(dá)到2165IU／g(干曲)，為YL一01—7的142．3％，YL一01的296％。2．2．3突變株遺傳穩(wěn)定性試驗將突變株YL一01—78連續(xù)轉(zhuǎn)接8代，8代菌株同102Q旦曼y旦!：曼!叢Q!!工Q!g!呈!曼!時進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，試驗結(jié)果見表4。結(jié)果表明，該菌株產(chǎn)酶能力變化不大，說明其遺傳性能比較穩(wěn)定。表4穩(wěn)定性試驗結(jié)果刪．，馨曲，z啷z螄zⅢzmz塒zmz蜥z御2．3產(chǎn)酶培養(yǎng)基的優(yōu)化2．3．1麩皮豆餅粉質(zhì)量比對產(chǎn)酶的影響試驗了麩皮和豆餅粉不同配比對

4、菌株產(chǎn)酶的影響。麩皮+豆餅粉=10．0g，魔芋粉0．19，(NH4)2S040．1g，水12．0mL；30℃培養(yǎng)84h。表5表明，2者比例為7：3時酶活最高。表5麩皮與豆餅粉比例對產(chǎn)酶的影響m(麩皮)：m(豆餅粉)10：O9：18：27：36：4酶活／IU·g一1(干曲)15131745213022781914相對酶活／％66．476．693．510084．02．3．2加水比例對產(chǎn)酶的影響適當(dāng)?shù)暮靠纱_保菌絲良好的生長和代謝產(chǎn)物的積累。由圖1可知，液固比1：1．2對菌株產(chǎn)酶最有利。主H-■即三蝰罐0．911．11．21．3液固比(g：g)圖1液固比對產(chǎn)酶的影響2．3．3

5、附加碳源對產(chǎn)酶的影響在以麩皮為主要碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基中，附加干料1％的其他碳源取代其中的魔芋粉，對照則不添加附加碳源，結(jié)果見表6。從表6可見，除甘露糖、羧甲基纖維素外，大多數(shù)試驗碳源對酶的產(chǎn)生有一定的促進(jìn)作用，甘露聚糖類的角豆膠、瓜兒豆膠、魔芋粉誘導(dǎo)效果明顯，魔芋粉效果最佳。表6附加不同碳源對產(chǎn)酶的影響附加碳源，。u．：霉干曲)相琴囂話附加碳源／IU．曼髯曲)相背活對照164573．7可溶性淀粉175278．5葡萄糖169676．0果膠180380_8甘露糖161672．4黃原膠165874．3半乳糖174378．1角豆膠196488．O乳糖174878．3瓜兒豆膠1841

6、82．5魔芋粉2232100唆甲基纖維素156069．9洲㈣跚帆2l1萬方數(shù)據(jù)萬方數(shù)據(jù)為1．865％，KH2P040．200％，MgS040．121％。此時理論最大產(chǎn)酶活性為2855IU／g(干曲)。為配制培養(yǎng)基方便，選擇魔芋粉、KH2P04、Mg—S04的含量分別為2％、0．2％、0．1％。2．4發(fā)酵條件的優(yōu)化2．4．1培養(yǎng)基起始pH對產(chǎn)酶的影響將最優(yōu)發(fā)培養(yǎng)基起始pH分別調(diào)為3．0～9．0(自然pH為6．0)，31℃發(fā)酵培養(yǎng)84h。從圖4可見，起始pH5．0～8．0酶活均占最高酶活的90％以上，且自然pH發(fā)酵效果最好。3456789pH圖4起始pH對產(chǎn)酶的影響2．4．2

7、培養(yǎng)溫度對產(chǎn)酶的影響將菌株分別于25、28、31、34℃下培養(yǎng)，48h后每隔12h取樣測定酶活。圖5表明，溫度過低，菌體生長緩慢，發(fā)酵周期長，酶活力不高；培養(yǎng)溫度達(dá)34℃時，雖然開始時產(chǎn)酶速度較快，但以后酶的增速減慢，最終酶活力仍不高；因此最適培養(yǎng)溫度為31℃。平，酶活快速增長，至72h，酶活力達(dá)到最大值3362Iu儋干曲，培養(yǎng)時間進(jìn)一步延長，酶活力逐漸下降。以酶活為指標(biāo)，培養(yǎng)時間72h最佳。35(m圣3(m0H_2j00k20003lS00鮭l000罐500()一3咐1020406080100120時間，h圖6產(chǎn)酶進(jìn)程曲線3