環(huán)狀芽孢桿菌wxy100產(chǎn)β甘露聚糖酶的發(fā)酵條件及初步應(yīng)用研究

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1、首都師范大學(xué)碩士學(xué)位論文環(huán)狀芽孢桿菌WXY-100產(chǎn)β-甘露聚糖酶的發(fā)酵條件及初步應(yīng)用研究姓名：楊新建申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：王金洛;徐福州20060530首都師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要B．甘露聚糖酶是由芽孢桿菌等分泌的一類能夠水解甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖的生物活性酶。近年來(lái)，它在降解植物膠生產(chǎn)功能性甘露低聚糖以及作為飼料添加劑等方面倍受關(guān)注。本試驗(yàn)以膠豆角和高溫為篩選條件，獲得一株高產(chǎn)B一甘露聚糖酶的環(huán)狀芽孢桿菌(命名為wxY．100)。通過(guò)正交設(shè)計(jì)方法篩選優(yōu)化該菌培養(yǎng)基配方和產(chǎn)酶條件，培養(yǎng)基配方為：酵母抽提物20g幾、魔芋粉209，L、刪H

2、mS0429／L、Ⅺ{2P0419，L、Mgs04·7H201g，L；產(chǎn)酶條件為：菌種種齡8—12h、接種量6％、裝液量25111l、pH7．5、培養(yǎng)溫度40℃、培養(yǎng)時(shí)間25h。根據(jù)上述最佳條件，該菌體產(chǎn)生的B一甘露聚糖酶的比活性最高可達(dá)到1002．25咖l。發(fā)酵液離心去除菌體，上清液經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀、透析、濃縮，得到相對(duì)較純的B一甘露聚糖酶，然后對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，結(jié)果為：在皿“～8和印℃以下穩(wěn)定，作用最適條件是p出．0和60℃，Cu“和co“對(duì)酶有比較顯著的激活作用，Ba“只有微弱的激活作用，H92+對(duì)酶有強(qiáng)烈的抑制作用，m”、Mn“、Fc“、zn2+、Ag+、F

3、e3+對(duì)酶有一定的抑制作用，EDTA、Ca2+、Mg“、F、Na+對(duì)酶活性影響不大。在環(huán)狀芽孢桿菌WXY一100產(chǎn)B．甘露聚糖酶的各項(xiàng)指標(biāo)篩選優(yōu)化的基礎(chǔ)上在發(fā)酵罐中進(jìn)行放大研究，通過(guò)在50L發(fā)酵罐中6一甘露聚糖酶發(fā)酵過(guò)程的規(guī)律以及操作條件(純氧的攝入、pH的變化、補(bǔ)料等)對(duì)發(fā)酵過(guò)程影響的篩選，獲得了環(huán)狀芽孢桿菌wxY一100產(chǎn)B一甘露聚糖酶的發(fā)酵罐放大工藝，進(jìn)而通過(guò)發(fā)酵罐的放大作用研究環(huán)狀芽孢桿菌w)“．100產(chǎn)B．甘露聚糖酶的特點(diǎn)，從而提供可宣接放大的參數(shù)，為進(jìn)一步工業(yè)生產(chǎn)提供方法和操作條件。最后本試驗(yàn)對(duì)環(huán)狀芽孢桿菌wxY-100發(fā)酵產(chǎn)物(主要成分為B·甘露聚糖酶)作

4、為飼料添加劑的應(yīng)用效果進(jìn)行了初步研究。通過(guò)發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)肉雞體重均勻度的影響及其抗感染作用研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵產(chǎn)物的添加可以有效的改善動(dòng)物的體重均勻度，改善程度平均在25％左右；同時(shí)可降低動(dòng)物感染后的死亡率，提高增重，降低料肉比。該研究結(jié)果提示環(huán)狀芽孢桿菌w)“．100發(fā)酵產(chǎn)物作為飼料添加劑具有較好的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：B．甘露聚糖酶；環(huán)狀芽孢桿菌；產(chǎn)酶條件：性質(zhì)：發(fā)酵；應(yīng)用首都師范大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractB—mannanase，akindofbjologicalenz，

5、IIlesecretedbymanymjcmo唱anismssuchas且∞珊郴c拋塒n馘call

6、hydr01yzegalactomallllall，galact091ucom鋤anofglucomann柚into01igosacch撕de．It’swidelyuSedinfeedadditivefordegradingvege詛blegIlmintoma帆a—01i90sacch撕detodealwithanti—nutritlonagents．UndertheselectivepressureofIocustbeangumandhightemperamre，asnainof且卵，脅凸c打℃耐講坫，ternledWXY*100，wasisolated卸dident

7、ifiedwithproducingneu刪B-m鋤nallase．ThccuItureingredje吣andcondnionswereoptimizedwith也e礎(chǔ)lononnaltableb(34)method．studiesshowedthattllecu蛔輯componentsforoptimi刪onofB-mafln柚aseproductionwercyeastexnact20g，L，Konjal(powder20嘰，講H4)2s042g兒，KH2P041g，La11dMgS04。7H20lg，L；aIldtheoptimalcuItureconditio

8、nswereseedincubationtime8—12h，inoculalionratio6％，culturevolme25mL，pH7．5，鳧rrnen協(xié)tiontemper咖re40℃afldferrnentationtime2sh．Thehi曲esten巧meactivbwas1002．25u，mlwhenprovidedwjthmeabovecu脅reingrcdientsandcondi廿ons．nlen，B-m踟anasewaspurifiedbyc咖ri如gation，deposition，dialysisa11dconc