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《velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株u266細胞凋亡研究(1)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、Velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞凋亡研究(1) 作者：陳麗娟，李建勇，錢思軒，朱廣榮，鄭文娟 【摘要】 為了研究velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞凋亡效應及機制，采用臺盼藍拒染法檢測2、10、50和100nmol/Lvelcade處理U266細胞活率，用流式細胞術分析Annexin-V、線粒體跨膜電位和氧自由基（ROS），用半定量RT-PCR法檢測bcl-2mRNA的表達。結(jié)果表明：velcade抑制U266細胞增殖；誘導U266細胞凋亡，24小時Annexin-V陽性細胞比例增高，△ψM降低；12小時
2、時活性氧明顯增高，熒光強度增強；抗凋亡基因bcl-2表達降低。結(jié)論：velcade對U266細胞具有增殖抑制和殺傷作用，其可通過內(nèi)源性細胞凋亡信號通路誘導U266細胞凋亡?！ 娟P鍵詞】velcade;多發(fā)性骨髓瘤;細胞凋亡 MultipleMyelomaCellLineU266ApoptosisInducedbyVelcade AbstractToinvestigatetheeffectofvelcadeonmultiplemyelomacelllineU266apoptosisanditsmechanism，cellviabili
3、tywasestimatedbytrypanbluedyeexclusion.Annexin-V，mitochondrialtransmembranepotentialandreactiveoxygenspecieslabeledbyDCFHDAwereexaminedbyflowcytometry，theexpressionofbcl-2mRNAwasdetectedbysemi-quatitativeRT-PCR.TheresultsshowedthatthevelcadeinhibitedthegrowthofU266cellsan
4、dreducedcellviabilityaccompaniedbyappearanceofmorphologiccharacteristicsofapoptosis.Velcadeat50nmol/LincreasedAnnexinVpositivityandfluorescenceintensityofDCFbecauseofROSgenerationwhileitdecreasedtheΔψmofU266cells.Expressionofanti-apoptoticgenebcl-2mRNAalsodecreased.Itisco
5、ncludedthatvelcadeinhibitethegrowthandreducecellviabilityofU266cells.VelcadecaninduceU266cellsapoptosisbyintrinsiccellapoptoticpathway. Keywordsvelcade;multiplemyeloma;apoptosis 多發(fā)性骨髓瘤（MM）是一種漿細胞克隆性增生的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，多發(fā)生于老年人。隨著社會人口的老齡化，其發(fā)病率呈逐漸增高的趨勢。幾十年來對MM一直采用激素和細胞毒性藥物聯(lián)合治療，盡管近年
6、來加用反應停抑制血管新生治療或采用自體骨髓移植治療，但其仍是一種不可治愈的血液系統(tǒng)腫瘤。由此可見，開發(fā)新的治療方法有重要的臨床價值。蛋白酶體抑制劑近年來作為MM新的治療制劑用于臨床試驗，本研究就臨床新藥蛋白酶體抑制劑velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞的凋亡作用進行探討?！ 〔牧虾头椒ā 〖毎囵B(yǎng) U266細胞置于含10%的熱滅活胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液（Gibco公司產(chǎn)品）中，于37℃、5%CO2和95%空氣濕度條件下進行培養(yǎng)。實驗過程中，細胞以（2-5）×105細胞/毫升的密度接種培養(yǎng)，并與不同濃度velca
7、de一起進行孵育，對照加DMSO。細胞活率由臺盼藍拒染法檢測，根據(jù)處理組存活細胞數(shù)與死細胞數(shù)的比例來計算。形態(tài)學觀察，細胞用cytospin收集至載玻片，用瑞氏染液染色并置于光學顯微鏡下觀察。每次試驗重復3次。生長抑制率及細胞活率按如下公式計算： 生長抑制率＝［／對照組細胞數(shù)］×100% 存活率＝［活細胞數(shù)／］×100% Annexin-V、線粒體跨膜電位和氧自由基（ROS）的流式細胞儀分析 Annexin-V分析 使用FITC標記的AnnexinV和PI雙染法檢測細胞凋亡，根據(jù)BectonDickinsonBioscienc
8、es公司提供的說明書進行操作。簡單地說，?。?-2）×105細胞，經(jīng)PBS漂洗后加100μl結(jié)合緩沖液，重懸細胞，加5μlAnnexinV-FITC，10μlPI避光孵育15分鐘后加400μl
