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《velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株u266細胞凋亡研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、Velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞凋亡研究作者:陳麗娟,李建勇,錢思軒,朱廣榮,鄭文娟【摘要】 為了研究velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞凋亡效應及機制,采用臺盼藍拒染法檢測2、10、50和100nmol/Lvelcade處理U266細胞活率,用流式細胞術(shù)分析Annexin-V、線粒體跨膜電位(Δψm)和氧自由基(ROS),用半定量RT-PCR法檢測bcl-2mRNA的表達。結(jié)果表明:velcade抑制U266細胞增殖;誘導U266細胞凋亡,24小時Annexin-V陽性細胞比例增高,△ψM降低;12小時時活性氧明顯
2、增高,熒光強度增強;抗凋亡基因bcl-2表達降低。結(jié)論:velcade對U266細胞具有增殖抑制和殺傷作用,其可通過內(nèi)源性細胞凋亡信號通路誘導U266細胞凋亡?!娟P(guān)鍵詞】velcade;多發(fā)性骨髓瘤;細胞凋亡 MultipleMyelomaCellLineU266ApoptosisInducedbyVelcade AbstractToinvestigatetheeffectofvelcadeonmultiplemyelomacelllineU266apoptosisanditsmechanism,cellviabilityatedbytryp
3、anbluedyeexclusion.Annexin-V,mitochondrialtransmembranepotential(Δψm)andreactiveoxygenspecies(ROS)labeledbyDCFHDAinedbyfloetry,theexpressionofbcl-2mRNAi-quatitativeRT-PCR.Theresultsshoorphologiccharacteristicsofapoptosis.Velcadeat50nmol/LincreasedAnnexinVpositivityandfluoresc
4、enceintensityofDCFbecauseofROSgenerationofU266cells.Expressionofanti-apoptoticgenebcl-2mRNAalsodecreased.Itisconcludedthatvelcadeinhibitethegroultiplemyeloma;apoptosis多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種漿細胞克隆性增生的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,多發(fā)生于老年人。隨著社會人口的老齡化,其發(fā)病率呈逐漸增高的趨勢。幾十年來對MM一直采用激素和細胞毒性藥物聯(lián)合治療,盡管近年來加用反應停抑制血管新生治療或采用
5、自體骨髓移植治療,但其仍是一種不可治愈的血液系統(tǒng)腫瘤。由此可見,開發(fā)新的治療方法有重要的臨床價值。蛋白酶體抑制劑近年來作為MM新的治療制劑用于臨床試驗,本研究就臨床新藥蛋白酶體抑制劑velcade誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266細胞的凋亡作用進行探討?! 〔牧虾头椒ā 〖毎囵B(yǎng) U266細胞置于含10%的熱滅活胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco公司產(chǎn)品)中,于37℃、5%CO2和95%空氣濕度條件下進行培養(yǎng)。實驗過程中,細胞以(2-5)×105細胞/毫升的密度接種培養(yǎng),并與不同濃度velcade一起進行孵育,對照加DMSO。細胞活率由臺
6、盼藍拒染法檢測,根據(jù)處理組存活細胞數(shù)與死細胞數(shù)的比例來計算。形態(tài)學觀察,細胞用cytospin(Shandon,Runcorn,UK)收集至載玻片,用瑞氏染液染色并置于光學顯微鏡下觀察。每次試驗重復3次。生長抑制率及細胞活率按如下公式計算:生長抑制率=[(對照組細胞數(shù)-處理組細胞數(shù))/對照組細胞數(shù)]×100% 存活率=[活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))]×100% Annexin-V、線粒體跨膜電位(Δψm)和氧自由基(ROS)的流式細胞儀分析 Annexin-V分析 使用FITC標記的AnnexinV和PI雙染法檢測細胞凋亡,根據(jù)Bect
7、onDickinsonBiosciences公司提供的說明書進行操作。簡單地說,取(1-2)×105細胞,經(jīng)PBS漂洗后加100μl結(jié)合緩沖液,重懸細胞,加5μlAnnexinV-FITC,10μlPI避光孵育15分鐘后加400μl結(jié)合緩沖液,用流式細胞儀檢測?! 【€粒體跨膜電位(Δψm)檢測 取5×105細胞,用PBS清洗1次,加入10μg/mlRh123(Sigma公司產(chǎn)品)37℃孵育30分鐘,用PBS漂洗1次,加入終濃度10μg/mlPI4℃暗處放置30分鐘,用流式細胞儀檢測?;钚匝鯗y定細胞內(nèi)活性氧測定方法參照 結(jié)果 velcade對
8、U266細胞增殖抑制和殺傷作用 研究結(jié)果表明,velcade可以抑制U266細胞的生長,同時伴有細胞活率的降低。U266細胞經(jīng)2、10