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《發(fā)酵液中植酸酶活性測定方法研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、發(fā)酵液中植酸酶活性測定方法的研究摘要:以釩鉬法對(duì)發(fā)酵液中植酸酶活性進(jìn)行了測定,并對(duì)影響酶活性測定結(jié)果的因素進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,釩鉬法測磷的靈敏度和線性范圍分別為0.025mmol/L和0.025mmol/L~0.60mmol/L;為減小植酸酶活性的測定誤差,結(jié)果測定必須在顏色反應(yīng)結(jié)束后的4h以內(nèi)完成。研究中同時(shí)發(fā)現(xiàn),發(fā)酵液含有的無機(jī)磷遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶活測定產(chǎn)生的無機(jī)磷含量,直接用發(fā)酵液測得的植酸酶酶活是不可靠的。通過對(duì)透析2h的發(fā)酵液進(jìn)行植酸酶酶活的測定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的最大相對(duì)偏差僅為7.1%。關(guān)鍵詞:釩鉬法;植酸酶;透析
2、;酶活StudyonanalysismethodsofphytaseactivityinfermentationbrothAbstract:Determinationofphytaseactivityinfermentationbrothbyvanadiu-molybdenummethodandthefactorsinfluencedresultswerestudied.Theresultsshowedthatthesensitivityandlinearrangeforinorganicphosphorusbyvan
3、adiu-molybdenummethodwere0.025mmol/Land0.025-0.60mmol/L,respectively.Detectionmustbefinishedwithin4haftercolourreactionfordecreaseoferror.Itwasalsofoundthatconcentrationofinorganicphosphorusinfermentationbrothwasmuchhigherthanthatofproducedbyenzymeactivityanddet
4、erminationofphytaseactivitydirectlywithfermentationbrothwasnotreliable.Therelativestandarddeviationoftheresultswas7.1%whenthefermentationbrothwasdialysedfor2h.Keywords:vanadiu-molybdenummethod;phytase;dialysis;phytaseactivity收稿日期:2009-12-24基金項(xiàng)目:泰山醫(yī)學(xué)院青年科學(xué)基金項(xiàng)目(200
5、8-2009)作者簡介:灑榮波(1978-),男,講師,研究方向?yàn)槲⑸锇l(fā)酵。phenotypesandreceptorstructure[J].Yeast,2004,7(6):559-574.[9]FUJIIT,HORICY.Furtherinvestigationonasubstanceisolatedfromwortinducingearlyflocculation[J].RepResLabKirinBrewCo,1975,18:75-85.[10]FUJINOS,YOSHIDAT.Prematurefloccu
6、lationofyeastinducedbysomewortconstituents[J].RepResLabKirinBrewCo,1976,19:45.!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!分析與檢測·167·2010No.4SerialNo.217ChinaBrewing植酸酶活力測定的準(zhǔn)確性是保證植酸酶研究和生產(chǎn)順利的基礎(chǔ),關(guān)于植酸酶測定方法的報(bào)道很多,主要采用比色法,但其一直存在著誤差大、不能準(zhǔn)確定量的問題[1-4]。目前測定
7、植酸酶活力應(yīng)用較廣的有4種方法:鉬酸銨-FeSO4法、鉬酸銨-VC法、鉬酸銨-氨基奈酚磺酸法以及釩鉬法。其中釩鉬法于1994年被美國分析化學(xué)專家列入AOAC(Associ-ationofAnalyticalCommunities)標(biāo)準(zhǔn)方法,我國也于2002年將釩鉬法作為測定飼用植酸酶活性的國家標(biāo)準(zhǔn)[5]。本研究優(yōu)化所得到的植酸酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方中含有3g/L的磷酸鹽[6],磷酸鹽的作用不僅是提供酵母生長所需的磷源,更重要的作用是調(diào)整發(fā)酵液的pH值,有利于畢赤酵母的生長。但此濃度的磷酸鹽在發(fā)酵過程中并沒有被全部消耗掉,畢赤
8、酵母生長所吸收的磷只占其中的一部分。由此對(duì)如何降低發(fā)酵液中無機(jī)磷對(duì)植酸酶活力測定的干擾并進(jìn)而提高植酸酶活力測定的準(zhǔn)確性進(jìn)行了初步研究。1材料與方法1.1菌株巴斯德畢赤氏酵母PichiapastorisKM71(his4arg4aox1::ARG4)、表達(dá)載體pPIC9k為Invitrogen公司產(chǎn)品,外源基因?yàn)榫诿}孢菌(Neur