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1、發(fā)酵液中植酸酶活性測定方法的研究摘要：以釩鉬法對(duì)發(fā)酵液中植酸酶活性進(jìn)行了測定，并對(duì)影響酶活性測定結(jié)果的因素進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，釩鉬法測磷的靈敏度和線性范圍分別為0.025mmol/L和0.025mmol/L~0.60mmol/L；為減小植酸酶活性的測定誤差，結(jié)果測定必須在顏色反應(yīng)結(jié)束后的4h以內(nèi)完成。研究中同時(shí)發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵液含有的無機(jī)磷遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶活測定產(chǎn)生的無機(jī)磷含量，直接用發(fā)酵液測得的植酸酶酶活是不可靠的。通過對(duì)透析2h的發(fā)酵液進(jìn)行植酸酶酶活的測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的最大相對(duì)偏差僅為7.1%。關(guān)鍵詞：釩鉬法；植酸酶；透析
2、；酶活StudyonanalysismethodsofphytaseactivityinfermentationbrothAbstract:Determinationofphytaseactivityinfermentationbrothbyvanadiu-molybdenummethodandthefactorsinfluencedresultswerestudied.Theresultsshowedthatthesensitivityandlinearrangeforinorganicphosphorusbyvan
3、adiu-molybdenummethodwere0.025mmol/Land0.025-0.60mmol/L,respectively.Detectionmustbefinishedwithin4haftercolourreactionfordecreaseoferror.Itwasalsofoundthatconcentrationofinorganicphosphorusinfermentationbrothwasmuchhigherthanthatofproducedbyenzymeactivityanddet
4、erminationofphytaseactivitydirectlywithfermentationbrothwasnotreliable.Therelativestandarddeviationoftheresultswas7.1%whenthefermentationbrothwasdialysedfor2h.Keywords:vanadiu-molybdenummethod;phytase;dialysis;phytaseactivity收稿日期：2009-12-24基金項(xiàng)目：泰山醫(yī)學(xué)院青年科學(xué)基金項(xiàng)目（200
5、8-2009）作者簡介：灑榮波（1978-），男，講師，研究方向?yàn)槲⑸锇l(fā)酵。phenotypesandreceptorstructure[J].Yeast，2004，7(6)：559-574.[9]FUJIIT,HORICY.Furtherinvestigationonasubstanceisolatedfromwortinducingearlyflocculation[J].RepResLabKirinBrewCo,1975,18:75-85.[10]FUJINOS,YOSHIDAT.Prematurefloccu
6、lationofyeastinducedbysomewortconstituents[J].RepResLabKirinBrewCo,1976,19:45.!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!分析與檢測·167·2010No．4SerialNo．217ChinaBrewing植酸酶活力測定的準(zhǔn)確性是保證植酸酶研究和生產(chǎn)順利的基礎(chǔ)，關(guān)于植酸酶測定方法的報(bào)道很多，主要采用比色法，但其一直存在著誤差大、不能準(zhǔn)確定量的問題[1-4]。目前測定
7、植酸酶活力應(yīng)用較廣的有4種方法：鉬酸銨-FeSO4法、鉬酸銨-VC法、鉬酸銨-氨基奈酚磺酸法以及釩鉬法。其中釩鉬法于1994年被美國分析化學(xué)專家列入AOAC（Associ-ationofAnalyticalCommunities）標(biāo)準(zhǔn)方法，我國也于2002年將釩鉬法作為測定飼用植酸酶活性的國家標(biāo)準(zhǔn)[5]。本研究優(yōu)化所得到的植酸酶發(fā)酵培養(yǎng)基配方中含有3g/L的磷酸鹽[6]，磷酸鹽的作用不僅是提供酵母生長所需的磷源，更重要的作用是調(diào)整發(fā)酵液的pH值，有利于畢赤酵母的生長。但此濃度的磷酸鹽在發(fā)酵過程中并沒有被全部消耗掉，畢赤
8、酵母生長所吸收的磷只占其中的一部分。由此對(duì)如何降低發(fā)酵液中無機(jī)磷對(duì)植酸酶活力測定的干擾并進(jìn)而提高植酸酶活力測定的準(zhǔn)確性進(jìn)行了初步研究。1材料與方法1.1菌株巴斯德畢赤氏酵母PichiapastorisKM71（his4arg4aox1::ARG4）、表達(dá)載體pPIC9k為Invitrogen公司產(chǎn)品，外源基因?yàn)榫诿}孢菌（Neur
