糙皮側(cè)耳液體深層培養(yǎng)條件的優(yōu)化

《糙皮側(cè)耳液體深層培養(yǎng)條件的優(yōu)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、糙皮側(cè)耳液體深層培養(yǎng)條件的優(yōu)化洪欽輝，郭桂珊，黃雨杏(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程，廣州510642)摘要：對(duì)粵西地區(qū)的蔭種資源進(jìn)行野外采集，通過對(duì)苘種的鑒定和分離培養(yǎng)，選取能產(chǎn)生漆酶的糙皮側(cè)耳進(jìn)行液體深層發(fā)酵，丼對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：糙皮側(cè)耳液體培養(yǎng)的蝻佳培養(yǎng)菽配方為：葡細(xì)糖1%，玉米粉4%,酵母膏0.7%,硝酸銨0.5%,KH2PO40.1%,MgSO4*7^00.05%;最佳培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)基裝景120mL/bottle,搖床轉(zhuǎn)速120r/min,pH5.4,溫度25°C。在此培養(yǎng)條件卜‘，糙皮側(cè)環(huán)牛長較好且表現(xiàn)出較島的分泌漆酶的能力。關(guān)鍵詞：糙皮

2、側(cè)耳；漆酶；液體培養(yǎng)；培養(yǎng)條件食用菌含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、維生素和碳水化合物，是營養(yǎng)豐富的天然食品，數(shù)據(jù)表明，食用菌的蛋D質(zhì)含量分別比蘆筍和卷心菜高2倍、比柑橘高4倍、比蘋果高12倍；按干重計(jì)算，食用菌通常含有19%?35%的蛋白質(zhì)，高于其他大多數(shù)食物甚至包括牛奶。而且食用菌含宥人類所必需的18種氨基酸，各種食用菌中賴氨酸的含量都很高。除了普通氨基酸和酰胺之外，食用藺還含冇不常見的氨基酸和相關(guān)的氮化合物。食用菌屮含有高比例的非飽和脂肪酸，也是其作為健康食品的重要因素之一。此外，食用菌還富含多種礦物質(zhì)、維生素、游離氨基酸、多糖、多肽和生物堿等活性成分，因而食用菌

3、還具有抗腫瘤、降血脂、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用。因此，開發(fā)和利用食用菌資源其宥廣闊的應(yīng)用前景。糙皮側(cè)耳因載培技術(shù)易掌握，產(chǎn)量高，我網(wǎng)近年來的栽培面積大幅度增長，其產(chǎn)量都居全W食用菌產(chǎn)量首位，但目前糙皮側(cè)耳的生產(chǎn)主要是進(jìn)行固體基質(zhì)培養(yǎng)，存在生長周期長、菌齡不一致、規(guī)?；潭刃〉奶攸c(diǎn)，而采用液體深層發(fā)酵可以使生產(chǎn)規(guī)?；⒐S化，并且其宥菌齡整齊、生長周期短的優(yōu)點(diǎn)。漆酶(Laccase)是很早就被認(rèn)識(shí)的一類含Cu原子的多酚氧化酶，廣泛存在于真菌屮，它與木質(zhì)素氧化物酶(Ligninperoxidase)和猛過氧化物酶(Manganeseperoxidase)都是參

4、與木質(zhì)素降解的關(guān)鍵酶。漆酶主要攻擊木質(zhì)素的苯酚結(jié)構(gòu)單元，可直接與木質(zhì)素底物相互作用，也可在中間氧化調(diào)節(jié)物質(zhì)存在卜*,與廣泛的底物作用。漆酶町用于紙漿漂白、污水去毒、從酒中除去酚類物質(zhì)以及抗菌素和類固醇的改造等，因而具有重要的應(yīng)用價(jià)值。木文就糙皮側(cè)耳的培養(yǎng)條件對(duì)產(chǎn)漆酶的影響做初步研究和分析。1材料和方法1.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基1.1.1固體培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）馬鈴薯20g,蔗糖1.5g，瓊脂2g,水lOOmL,自然pH1.1.2液體培養(yǎng)基蔗糖2g，玉米粉3g（煮汁），麥麩3g（煮汁），酵母粉O.3g，KH2PO4O.lg,MgSO4?7H2O0.05g,水lOOmL，p

5、H6.01.2培養(yǎng)方法1.2.1菌種固體擴(kuò)大培養(yǎng)將菌種從保存斜面接種到PDA培養(yǎng)基平板上，25"C恒溫培養(yǎng)7d得到平板母種。1.2.2搖瓶種子培養(yǎng)將悶體母種分割成小塊，每瓶接入四塊稍帶培養(yǎng)基的母種（如蠶豆大小），25'C,150r/min振蕩培養(yǎng)。1.2.3搖瓶擴(kuò)人培養(yǎng)將得到菌種以10%的接種量轉(zhuǎn)接到各處理搖瓶屮。通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定最優(yōu)化的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件。1.3測(cè)定方法1.3.1茼球直徑的測(cè)定取ImL發(fā)酵液于培養(yǎng)皿屮用水稀釋10倍，隨機(jī)取10個(gè)菌球在培養(yǎng)皿屮排成一行，用游標(biāo)卡尺測(cè)定總長度。（3次取平均）1.3.2菌球數(shù)量的測(cè)定取ImL發(fā)酵液于培養(yǎng)

6、皿中稀釋10倍，于培養(yǎng)皿下墊置方格紙計(jì)數(shù)。（3次取平均）1.3.3菌絲體生物量的測(cè)定生長&好、無污染的搖瓶培養(yǎng)物于4000r/minK離心15min，取沉淀物稱鮮重即為菌絲體生物量。重復(fù)3次取平均值。1.3.4漆酶的活性測(cè)定111酶液的制備：取發(fā)酵液，4000r/min離心15min,取上清液。0.5mL3.36mmol/L臨聯(lián)中苯胺+3.4mL0.1mol/LPH4.6醋酸鹽緩沖液+0.1mL粗酶液。28°C恒溫水浴保溫30min,測(cè)定A600。以每分鐘OD值增加0.01為一個(gè)酶活單位。1.3.5蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定：紫外吸收法121取ImL粗酶液，用蒸餾水稀釋2

7、5倍，搖勻比色，測(cè)A280、A260,以蒸餾水做空0樣。蛋白質(zhì)含量(mg/mL)=(1.45A280-0.74A260)X251.4培養(yǎng)條件優(yōu)化組合實(shí)驗(yàn)1.4.1碳源單因素實(shí)驗(yàn)以酵母膏1%為氮源，KH2PO40.1%、MgSO4?7H2O0.05%為無機(jī)鹽，對(duì)葡萄糖、蔗糖、麥麩、玉米粉四種碳源2%進(jìn)行單因素對(duì)比實(shí)驗(yàn)，選擇兩種對(duì)生長最好、產(chǎn)漆酶最多的做正交實(shí)驗(yàn)。其屮麥麩、玉米粉煮沸30min,八層紗布過濾，取其濾液備用，下同。以玉米粉2%為碳源，KH2PO40.1%、MgSO4?7H2O0.05%為無機(jī)鹽，對(duì)酵母膏、黃豆粉、硫酸銨、硝酸銨四種氮源1%進(jìn)行單岡素對(duì)比

8、實(shí)驗(yàn)，選擇兩種對(duì)生K最好