大黃素抑制hl60-adr耐藥細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用

《大黃素抑制hl60-adr耐藥細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、大黃素抑制HL60/ADR耐藥細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用作者：陳英玉，鄭合勇，胡建達(dá)，鄭志宏，鄭靜，連曉嵐，呂聯(lián)煌【摘要】本研究探討中藥大黃素（emodin）對人白血病耐藥細(xì)胞株HL60/ADR的增殖、凋亡影響及其相應(yīng)的可能作用機(jī)制。采用MTT法繪制細(xì)胞生長曲線；集落培養(yǎng)法觀察大黃素對HL60/ADR克隆形成的影響；細(xì)胞周期分析、線粒體跨膜電位檢測、Caspase3酶活性檢測、AnnexinVFITC/PI法、TdT酶介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)分析凋亡細(xì)胞；RTPCR及yc、Caspase3前體蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果表明，大黃素對HL60/ADR細(xì)胞增殖具有明

2、顯的抑制作用，呈時間和濃度依賴性。較低濃度大黃素即可抑制HL60/ADR細(xì)胞集落形成，IC50值為5.79μmol/L。細(xì)胞周期分析顯示，與對照組比較，40、80μmol/L濃度組細(xì)胞被阻滯于G0/G1期比率明顯增高（p<0.01），G2/M期細(xì)胞比率降低（p<0.01），而20μmol/L濃度組細(xì)胞周期改變差異不具有顯著性（p>0.05），各濃度組均檢測到典型的亞二倍體峰（凋亡峰）。大黃素作用12小時HL60/ADR細(xì)胞線粒體跨膜電位降低，AnnexinVFITC/PI法檢測到早期凋亡細(xì)胞，作用24小時caspase3酶活性顯著升高，作用48小時TUNEL法檢

3、測到晚期凋亡細(xì)胞，細(xì)胞凋亡率呈藥物濃度依賴性。大黃素作用HL60/ADR細(xì)胞不同時間段，bcl2、cmycmRNA和Bcl2、cMyc、Caspase3前體蛋白表達(dá)水平均有不同程度下調(diào)，并呈時間依賴性。結(jié)論：大黃素能夠有效抑制HL60/ADR細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡，bcl2、cmyc表達(dá)水平下調(diào)，線粒體跨膜電位水平降低和caspase3激活可能參與了該過程。【關(guān)鍵詞】細(xì)胞增殖InhibitoryEffectsofEmodinonDrugresistantHL60/ADRCellProliferationandItsInductionofApoptosisAbst

4、ractThestudyedtoinvestigatetheeffectsofemodinontheproliferationandapoptosisofadriamycinresistantHL60/ADRcells,andtoexploretheunderlyingmechanism.Thecellviabilityandcolonyformationationassayrespectively.Apoptoticcellseansofcellcycleanalysis,mitochondrialtransmembranepotentiallevels,caspase3act

5、ivitydetection,AnnexinVFITC/PIstainingandTUNELlabeling.RTPCRycmRNAexpressions.TheprotEinexpressionsofBcl2，cMycandcaspase3precursorinedbyyc,caspase3precursorprotEInedependentmanneraftertreatmentodinatdifferenttimes.Itisconcludedthatemodinefficientlyinhibitsgroayberelateditochondrialtransmem

6、branepotentialandexpressionsofbcl2andcmyc,asodin;HL60/ADRcell;proliferation;apoptosisJExpHematol2007;15(5):955-960大黃素（emodin），化學(xué)名稱為6－甲基－1,3,8－三羥基蒽醌，是從大黃屬、鼠李屬、蓼屬和番瀉葉等中藥中提取的一種蒽醌類單體化合物。研究表明，大黃素能夠抑制包括神經(jīng)外胚層腫瘤、肺癌、肝癌、髓系白血病等多種腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡［1-5］，具有明顯的抗腫瘤活性，但對人白血病耐藥細(xì)胞株HL60/ADR作用的研究未見國內(nèi)外線粒體跨膜電位的變化藥物作用12

7、小時后，對照組線粒體跨膜電位下降的細(xì)胞數(shù)很少，占0.51%；20μmol/L、40μmol/L組分別為5.47%、15.90%；80μmol/L組線粒體跨膜電位下降的細(xì)胞數(shù)明顯增多，占52.44%（圖2）。早期凋亡細(xì)胞的比率大黃素作用HL60/ADR12小時即可以檢測到早期凋亡細(xì)胞,20、40μmol/L藥物組凋亡率為8.05%、23.70%,80μmol/L作用組的凋亡率最高，達(dá)到35.01%,而對照組僅2.12%（圖3）。Caspase